電泳技術(shù)方王楷ppt課件-文庫吧在線文庫
【正文】 正電荷或負(fù)電荷的基團(tuán)。用濾紙吸干薄膜。使蛋白固定并染色，再脫色（洗去多余染料）。 5. 支持介質(zhì)的篩孔 ： 篩孔越小，則顆粒在移動(dòng)的過程中所受到的阻力也就越大 分 類 按 支持介質(zhì) 的不同可分為： ⑴ 紙電泳（ Paper electrophorisis） ⑵ 醋酸纖維薄膜電泳（ Cellulose Acetate electrophoresis） ⑶ 瓊脂凝膠電泳（ Agar Gel electrophoresis） ⑷ 聚丙烯酰胺凝膠電泳（ Polyacrylamide Gel electrophoresis）（ PAGE） ⑸ SDS－聚丙烯酰胺凝膠電泳（ SDS－ PAGE）。 u＝ v/E=q/6πrη v=QX /6πrη 在具體實(shí)驗(yàn)中 ， 移動(dòng)速度 V為單位時(shí)間 t（ 單位為 s） 內(nèi)移動(dòng)的距離 d（ 單位為 cm） ， 即 V＝ d/t。 生物分子都帶電荷 ， 其電荷的多少取決于分子性質(zhì)及其所在介質(zhì)的 pH及其組成 。 影 響 因 素 1. 待分離大分子的性質(zhì) ： 所帶的電荷、分子大小和形狀，分子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形，則其電泳遷移速度越快 2. 緩沖液 pH和離子強(qiáng)度 ： pH值距離其等電點(diǎn)愈遠(yuǎn)，其所帶凈電荷量就越大，電泳的速度也就越大 ；但是 pH過高或過低引起蛋白變性，緩沖液通常要保持一定的離子強(qiáng)度；強(qiáng)度過低，則緩沖能力差，不易維持 PH恒定，離子強(qiáng)度過高，在待分離分子周圍形成較強(qiáng)的帶相反電荷的離子擴(kuò)散層（即離子氛），降低了蛋白質(zhì)的帶電量，使電泳速度減慢。分子量和構(gòu)型不同的蛋白質(zhì)分子，通過一定孔徑的凝膠時(shí)所受阻力不同，引起泳動(dòng)速度的變化，從而達(dá)到分離目的。在膜的 無光澤面 距一端 2cm 處點(diǎn)樣（膜不 能折；在膜上標(biāo)記記號(hào)）。 3 ） 光 光度計(jì) 比色 ， 波長 為 650 nm ， 以 空白 薄膜 條 洗 出 液 為 空白 對(duì)照 ， 讀取 其它 5 管 的 光 密度 值 。 因?yàn)?A m p h o l i n e 形成的 pH 梯度是一較平滑的穩(wěn)定的 pH 梯度，從理論上講，只要蛋白質(zhì)的 pI 相差 0 . 0 1 就可分離。 剝 膠 用帶有針頭的注射器吸入蒸餾水，
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