【正文】 復(fù)幾次，至背景漂凈為止。 c 立即用 5ml注射器配針頭注入約 ，垂直放置（ 將長滴管及時清洗 ） 注意：丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺是神經(jīng)毒劑，對皮膚有刺激作用，注意避免直接接觸。 因為 A m p h o l i n e 形成的 pH 梯度是一較平滑的穩(wěn)定的 pH 梯度，從理論上講，只要蛋白質(zhì)的 pI 相差 0 . 0 1 就可分離。在膜的 無光澤面 距一端 2cm 處點樣（膜不 能折；在膜上標(biāo)記記號）。 影 響 因 素 1. 待分離大分子的性質(zhì) ： 所帶的電荷、分子大小和形狀，分子帶的電荷量越大、直徑越小、形狀越接近球形，則其電泳遷移速度越快 2. 緩沖液 pH和離子強(qiáng)度 ： pH值距離其等電點愈遠(yuǎn)，其所帶凈電荷量就越大，電泳的速度也就越大 ；但是 pH過高或過低引起蛋白變性，緩沖液通常要保持一定的離子強(qiáng)度；強(qiáng)度過低，則緩沖能力差，不易維持 PH恒定，離子強(qiáng)度過高，在待分離分子周圍形成較強(qiáng)的帶相反電荷的離子擴(kuò)散層（即離子氛），降低了蛋白質(zhì)的帶電量，使電泳速度減慢。 u＝ v/E=q/6πrη v=QX /6πrη 在具體實驗中 ， 移動速度 V為單位時間 t（ 單位為 s） 內(nèi)移動的距離 d（ 單位為 cm） ， 即 V＝ d/t。使蛋白固定并染色，再脫色（洗去多余染料）。 蛋白質(zhì)具有許多可解離的酸性基團(tuán)（－ COOH）和堿性基團(tuán)（－ NH2）及其它基團(tuán) ,在一定溶液的 pH條件下可解離成帶正電荷或負(fù)電荷的基團(tuán)。 上槽接正極 ， 下槽接負(fù)極 ， 50V預(yù)電泳 30min，然后將電壓維持在 250 V，電泳 2小時 。 2 ） 剪 下 各 條 蛋白 帶 和 在 膜 空白 部位 剪 一條 帶 （ 空白 帶 的 寬 度 以 最 窄 的 條帶 為 準(zhǔn) ， why ？ ） ， 將 各 條 帶 浸 入 試管 ， 不時 搖動 ， 洗 脫 藍(lán)色 。 具有如下優(yōu)點： 1 、 一定濃度下，凝膠透明，有彈性，機(jī)械性能好 2 、 化學(xué) 性能 穩(wěn)定 ， 與 被 分離 物 不起 化學(xué) 反應(yīng) 3 、 對 pH 和 溫度 變化 較 穩(wěn)定 4 、 幾乎 無 電滲 作用 ， 樣品 分離 重復(fù) 性 較好 5 、 樣品 不易 擴(kuò)散 ，