電泳技術(shù)方王楷ppt課件(存儲版)
【正文】 準(zhǔn)備與點樣 1 ） 將已充分浸透的醋酸纖維膜取出，用濾紙吸去多余的 緩沖液。 2 ） 剪 下 各 條 蛋白 帶 和 在 膜 空白 部位 剪 一條 帶 （ 空白 帶 的 寬 度 以 最 窄 的 條帶 為 準(zhǔn) ， why ？ ） ， 將 各 條 帶 浸 入 試管 ， 不時 搖動 ， 洗 脫 藍(lán)色 。 NH3+ + OH－ NH3+ + OH－ NH2 P P P COOH ＋ H＋ COO－ ＋ H＋ COO－ 蛋白質(zhì)的陽離子 蛋白質(zhì)的兼性離子 蛋白質(zhì)的陰離子 以聚丙烯酰胺作為支持物，兩性電解質(zhì)（ A m p h o l i n e ）在支持物內(nèi)形成穩(wěn)定的 pH 梯度，當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)在電場力的作用下，便會在支持物中運動到相當(dāng)于自身 pH 梯度中聚合成一狹窄的區(qū)帶而停留。 上槽接正極 ， 下槽接負(fù)極 ， 50V預(yù)電泳 30min，然后將電壓維持在 250 V，電泳 2小時 。 電 泳 將已聚合的凝膠去除水層，垂直插入電泳槽的橡皮管中，注意不要漏液 。 蛋白質(zhì)具有許多可解離的酸性基團(tuán)（－ COOH）和堿性基團(tuán)（－ NH2）及其它基團(tuán) ,在一定溶液的 pH條件下可解離成帶
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