《電泳技術(shù)方王楷》ppt課件(文件)
【正文】 + 白蛋白 (A) α1 α2 β γ 血清蛋白的 pI 大多在 7 . 5 以下，在 p H8 . 6 的巴比妥緩沖液中以負(fù)離子形式存在，并且蛋白質(zhì)的分子量、立體構(gòu)象、等電點(diǎn)及形狀也有差異，在電場(chǎng)中遷移速度不同，可以在醋酸纖維薄膜上分離成 A 、 α 1 、 α 2 、 β 、 γ 五條區(qū)帶。 蛋白質(zhì)具有許多可解離的酸性基團(tuán)（－ COOH）和堿性基團(tuán)（－ NH2）及其它基團(tuán) ,在一定溶液的 pH條件下可解離成帶正電荷或負(fù)電荷的基團(tuán)。 血紅蛋白的pI 約在 6 . 9 ，細(xì)胞色素 C 的 pI 為 10 . 5 ，兩者的 pI 相差較大，可以得到較好的分離。 電 泳 將已聚合的凝膠去除水層，垂直插入電泳槽的橡皮管中，注意不要漏液 。靠水流壓力將膠與玻璃管分開(kāi)，最后可用吸耳球在一端輕輕施壓，將其取下。 上槽接正極 ， 下槽接負(fù)極 ， 50V預(yù)電泳 30min，然后將電壓維持在 250 V，電泳 2小時(shí) 。 b 按實(shí)驗(yàn)指導(dǎo) page 17 配制凝膠液（ 按順序，每加一種試劑后都要輕輕充分搖勻， TEMED最后才加入，加入搖勻后要立即灌膠 ），用長(zhǎng)滴管吸取配好的凝膠液，沿玻璃管注入至7 ml標(biāo)記平面，緩緩注入， 避免產(chǎn)生氣泡 。 NH3+ + OH－ NH3+ + OH－ NH2 P P P COOH ＋ H＋ COO－ ＋ H＋ COO－ 蛋白質(zhì)的陽(yáng)離子 蛋白質(zhì)的兼性離子 蛋白質(zhì)的陰離子
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