《高效毛細(xì)管電泳》ppt課件(文件)
【正文】 際電泳過程中，出了溶質(zhì)的縱向擴(kuò)散外，還存在很多引起譜峰展寬的因素，如焦耳熱、吸附等。 35 小內(nèi)徑毛細(xì)管散熱面積大，溫度梯度小，譜峰展寬小。這種粒子的質(zhì)荷比很大，可以減小工作電流。造成管內(nèi)壁表面吸附的主要原因有兩個(gè) : ① 在電解質(zhì)溶液 PH大于 3時(shí)，石英毛細(xì)管壁帶負(fù)電荷，因靜電引力溶質(zhì)陽離子被管壁吸附。 （ 2）對(duì)管壁內(nèi)表面加以修飾 （三）分離度 毛細(xì)管中的分離度也用 R表示， 可按譜圖直接由下式計(jì)算： 21mmWW)tt(2R 12???38 分離度也可表示為柱效的函數(shù)： apapapapapapapapapapapapefapefapefmmmmmmmmmmVVnVVVVnVVVVVnVLVLVLntttnntttWttWW)tt(R????????????????????????4444442221122112211212121239 apefepapefapapapapapDLVL.DEL.nvvnR????????????????1770177044DL2VLD2ELD2vLHLn efapefapapefef ??????影響分離度的主要因素 ①工作電壓 V；②毛細(xì)管有效長度與總長度比； ③相鄰兩組分的有效電泳淌度差；④表觀淌度。 41 42 一、高壓電源 （ 1） 0～ 30 kV 穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源； （ 2）具有恒壓、恒流、恒功率輸出； （ 3）電場強(qiáng)度程序控制系統(tǒng)； （ 4）電壓穩(wěn)定性： %； （ 5）電源極性易轉(zhuǎn)換； 二、電極槽 CE的電極通常由直徑 ~ 1 mm的鉑絲制成，電極槽通常是帶螺口的小玻璃瓶或塑料瓶（ 1 ~ 5 mL不等），要便于密封。 LctrPQ i??????84進(jìn)樣量與組分的淌度無關(guān)。 毛細(xì)管長度稱為總長度，根據(jù)分離度的要求，可選用 20～ 100cm長度，進(jìn)樣端至檢測器間的長度稱為有效長度。 將毛細(xì)管接近出口端的外層聚合物剝?nèi)ゼs2mm一段，使石英管壁裸露，毛細(xì)管兩側(cè)各放置一個(gè)石英聚光球，使光源聚焦在毛細(xì)管上，透過毛細(xì)管到達(dá)光電池 , 實(shí)行柱上檢測。 中性粒子 ：無電泳現(xiàn)象，隨電滲流同行，在陽離子后流出。 53 (5)只要條件允許就盡可能采用酸性緩沖液，在低 pH值下，吸附和電滲流都很小，毛細(xì)管涂層的壽命較長。在焦耳熱可以忽略的條件下，外加電壓增大，分離時(shí)間縮短、柱效和分離度提高 . 56 但電壓升高，產(chǎn)生的焦耳熱增多，在不能有效地驅(qū)散所產(chǎn)生的焦耳熱情況下，柱溫顯著升高，工作電流增大，柱效和分離度降低。 把離子型表面活性劑 (如十二烷基硫酸鈉 )加到緩沖液中 , 當(dāng)其濃度超過臨界濃度后就形成有一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束。當(dāng)溶質(zhì)進(jìn)入膠束時(shí)，以膠束的速度慢速遷移；溶質(zhì)進(jìn)入緩沖溶液時(shí)，以電滲的速度快速前移。 準(zhǔn)固定相為各類表面活性劑，對(duì)其要求是： ① 膠束的粘度??； ②水溶性好 ③形成的膠束必須均勻、透明，不吸收 UV光 ④ 臨界膠束濃度 CMC不宜太高 ⑤膠束具有足夠的穩(wěn)定性 63 類 型 表面活性劑 CMC（ 103mol/L） 陰離子表面活性劑 十二烷基硫酸鈉（ SDS） 十四烷基硫酸鈉（ STS） N月桂酰 N甲基?；撬徕c（ LMT） 聚氧乙烯醚基十二烷基硫酸鈉 兩性離子表面活性劑 N十二?；?L氨酸鈉（ SDVal） 陽離子表面活性劑 十二烷基三甲基氯化銨（ DTAC） 16 十二烷基三甲基溴化銨（ DTAB） 15 十四烷基三甲基溴化銨（ TTAB） 十六烷基三甲基溴化銨（ CTAB） 一些常用的表面活性劑及其臨界濃度 64 65 三、毛細(xì)管凝膠電泳（ CGE） 將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成一個(gè)細(xì)長的網(wǎng)狀多孔凝膠，其具有多孔性，類似分子篩的作用。 66 酶解的雙螺旋 DNA限制性片段的分離 67 四、毛細(xì)管電色譜（ CEC） 將細(xì)粒徑固定相填充到毛細(xì)管中或在毛細(xì)管內(nèi)壁鍵合固定相，毛細(xì)管兩端施加高電壓，以電滲流驅(qū)動(dòng)操作緩沖液。 。 電滲泵產(chǎn)生的是塞子式流動(dòng)輪廓，而不是流體動(dòng)力學(xué)層流輪廓，因此毛細(xì)管電色譜的分離柱效比高效液相色譜法高。大分子受到的阻力大，移動(dòng)速度慢，小分子受到的阻力小，移動(dòng)速度快，從而使它們得以分離。 62 M
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