高效毛細(xì)管電泳ppt課件-文庫吧資料
2025-05-13 12:08本頁面
【正文】 度，進樣端至檢測器間的長度稱為有效長度。 46 四、毛細(xì)管柱 常用彈性石英毛細(xì)管，內(nèi)徑 50μm和 75μm兩種使用較多（毛細(xì)管電色譜有時用內(nèi)徑再大些的毛細(xì)管）。 LctrPQ i??????84進樣量與組分的淌度無關(guān)。 1. 電動進樣 將毛細(xì)管柱的一端及其相應(yīng)端的電極從緩沖池中移出，放入試樣杯中，然后在一準(zhǔn)確時間范圍內(nèi)施加電壓，使試樣因離子移動和電滲流進入毛細(xì)管柱。 41 42 一、高壓電源 （ 1） 0～ 30 kV 穩(wěn)定、連續(xù)可調(diào)的直流電源； （ 2）具有恒壓、恒流、恒功率輸出； （ 3）電場強度程序控制系統(tǒng)； （ 4）電壓穩(wěn)定性： %； （ 5）電源極性易轉(zhuǎn)換； 二、電極槽 CE的電極通常由直徑 ~ 1 mm的鉑絲制成，電極槽通常是帶螺口的小玻璃瓶或塑料瓶（ 1 ~ 5 mL不等），要便于密封。CE只需高壓直流電源、進樣裝置、毛細(xì)管和檢測器等。 （ 2）對管壁內(nèi)表面加以修飾 （三）分離度 毛細(xì)管中的分離度也用 R表示， 可按譜圖直接由下式計算： 21mmWW)tt(2R 12???38 分離度也可表示為柱效的函數(shù)： apapapapapapapapapapapapefapefapefmmmmmmmmmmVVnVVVVnVVVVVnVLVLVLntttnntttWttWW)tt(R????????????????????????4444442221122112211212121239 apefepapefapapapapapDLVL.DEL.nvvnR????????????????1770177044DL2VLD2ELD2vLHLn efapefapapefef ??????影響分離度的主要因素 ①工作電壓 V；②毛細(xì)管有效長度與總長度比； ③相鄰兩組分的有效電泳淌度差；④表觀淌度。 抑制或消除吸附的常用方法有： 37 （ 1）采用極端 pH條件。造成管內(nèi)壁表面吸附的主要原因有兩個 : ① 在電解質(zhì)溶液 PH大于 3時，石英毛細(xì)管壁帶負(fù)電荷，因靜電引力溶質(zhì)陽離子被管壁吸附。冷卻溫控的方法有兩種，氣冷和液冷，一般條件下，用氣冷已可以滿足要求。這種粒子的質(zhì)荷比很大，可以減小工作電流。因此目前采用的多是內(nèi)徑 25～ 75μm柱子。 35 小內(nèi)徑毛細(xì)管散熱面積大，溫度梯度小，譜峰展寬小。焦耳熱通過管壁向周圍環(huán)境散熱，管中心溫度最高，由中心向管壁溫度逐漸下降。 在實際電泳過程中，出了溶質(zhì)的縱向擴散外，還存在很多引起譜峰展寬的因素，如焦耳熱、吸附等。 大分子比小分子擴散系數(shù)小，可以獲得更高的分離效率。 Vap小， tm長，譜峰展寬。根據(jù)范第母特方程 1. 縱向擴散 apvD2H ?D是溶質(zhì)組分的擴散系數(shù) 33 DL2VLD2ELD2vLHLn efapefapapefef ??????V是電壓， L是毛細(xì)管全長。因為毛細(xì)管中，沒有固定相，不存在組分在固定相中分配和保留。 30 31 四、柱效和分離度 （一）理論塔板數(shù)和塔板高度 用理論塔板數(shù) n和塔板高度 H表示柱效。 溫度每變化 1度，將引起背景電解質(zhì)溶液粘度變化 2%～ 3%； 29 5. 添加劑的影響 （ 1）加入濃度較大的中性鹽，如 K2SO4，溶液離子強度增大，電滲流減小。 （ 3）緩沖液濃度（離子強度）的影響 27 28 4. 溫度的影響 毛細(xì)管內(nèi)溫度的升高，使溶液的粘度下降，電滲流增大。 26 緩沖溶液離子強度，影響雙電層的厚度、溶液粘度和工作電流，明顯影響電滲流大小。分析時，采用緩沖溶液來保持 pH穩(wěn)定。 24 三、 HPCE中影響電滲流的因素 電滲流速度和電場強度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長度一定時，電滲流速度正比于工作電壓。 電滲流在 HPCE 的分離中起著極其重要的作用： ③ 電滲流的微小變化影響分離結(jié)果的重現(xiàn)性 （遷移時間和峰面積） 。 ② 改變電滲流的大小和方向，可以改變分離效率和選擇性。 vap=μapE=(μos177。 21 22 陽離子： vap＝ vos+vef 陰離子： vap＝ vos－ vef 中性分子： vap＝ vos 當(dāng)把試樣從陽極端注入到毛細(xì)管內(nèi)時，不同電性的粒子將按不同的速度向負(fù)極遷移，
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