高效毛細(xì)管電泳在蛋白質(zhì)分析中應(yīng)用-文庫吧資料
2025-05-06 18:03本頁面
【正文】 生的變化服從朗伯 比爾定律，即在一定的實(shí)驗條件下，吸光度與被測組分的濃度成正比?？刹捎梅峭繉庸埽源蠓肿泳垡叶紴楹Y分介質(zhì)，以 NGCE模式進(jìn)行蛋白質(zhì)樣品的檢測。 無膠篩分毛細(xì)管電泳 (nongel sieving capillary electrophoresis， NGCE) ? 是近年來發(fā)展起來的一種用于檢測核酸的新方法，與毛細(xì)管凝膠電泳相比，具有向毛細(xì)管內(nèi)注入篩分介質(zhì)方便，易于沖洗，毛細(xì)管可反復(fù)使用，以及便于實(shí)現(xiàn)自動化等優(yōu)點(diǎn)。 ( 2) 涂層可再生。 緩沖液 , 40mM 磷酸鈉 。分離條件 : 毛細(xì)管 , 內(nèi)徑 50μm, 總長 48cm( 有效長度 40cm) 。 另一方面 , 毛細(xì)管內(nèi)的聚合反應(yīng)很難控制 , 容易造成涂層的不均一性、不規(guī)整性 , 甚至阻塞毛細(xì)管。 然后 , 通過硅烷化試劑末端雙鍵與適宜單體共聚生成聚合物覆蓋在毛細(xì)管內(nèi)表面 , 形成永久涂層。 上述兩種方法只能從一定程度上降低蛋白質(zhì)吸附 , 而且 pH 值過高 ( 或過低 ) , 小分子添加劑濃度過大都會導(dǎo)致蛋白質(zhì)聚集和變性。 胺類 , 三乙醇胺 、三乙胺、 N乙基二乙醇胺 、 N , N, N?? , N?? 四甲基 1, 3 丁二胺 ( TMBD) 等 。 添加小分子添加劑 在 CE 分離中 , 除了背景電解質(zhì)外 , 常常還在緩沖溶液中添加某種成分 , 常用添加劑有 : 表面活性劑 , 如季銨鹽和氟化的陽離子表面活性劑 。 在低pH 下 , 硅羥基主要以不帶電的質(zhì)子化形式存在 , 壁電荷非常小 , 可以減少吸附。 ( a) 堿性蛋白質(zhì) ( pI= 8) 所帶電荷量隨 pH 的變化曲線 。 若緩沖溶液的 pH 值低于蛋白質(zhì)等電點(diǎn) , 蛋白質(zhì)則吸附 H+ 而帶正電荷 , 由于靜電相互作用 ,蛋白質(zhì)與管壁發(fā)生吸附當(dāng) pH 值增大到接近等電點(diǎn)時 , 蛋白質(zhì)顯中性 , 不帶電 。 存在的問題 毛細(xì)管內(nèi)壁對蛋白質(zhì)產(chǎn)生吸附的原因 毛細(xì)管電泳中的蛋白質(zhì)吸附 , 可源于疏水作用、靜電作用和其它多種兩相分配機(jī)制。 蛋白質(zhì)對毛細(xì)管內(nèi)壁的吸附某種程度上限制了毛細(xì)管電泳在該領(lǐng)域的應(yīng)用。 常用的篩分介質(zhì)有兩大類，一是各種凝膠，應(yīng)用于 CGE,適合于蛋白質(zhì)分離的凝膠有線性聚丙烯酰胺、交聯(lián)聚丙烯酰胺和瓊脂糖等。 ? 蛋白的鑒別分析通常包括對氨基酸的組成和序列、一些物化常數(shù)如分子量和等電點(diǎn)等的測定，以區(qū)分和鑒定結(jié)構(gòu)和種類不同的蛋白質(zhì) 氨基酸與蛋白質(zhì)分析 analysis of amino acids 蛋白質(zhì)分析 核酸分析及 DNA排序 analysis of nucleic acids and sequence of DNA 重要分析手段； 圖，酶解的雙螺旋DNA限制性片段的分離； 蛋白質(zhì)的尺寸分離 蛋白質(zhì)的尺寸分離或分子量測定，是化學(xué)等研究中的重要工作，通常利用超速離心、 質(zhì)譜 、凝膠排斥色譜、 SDSPAGE等方法完成。中性分子在膠束相和溶液（水相）間分配，疏水性強(qiáng)的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時間長； ? 可用來分離中性物質(zhì)，擴(kuò)展了高效毛細(xì)管電泳的應(yīng)用范圍。 膠束電動毛細(xì)管色譜（ MECC ， MEKC） micellar electrokiic capillary chromatography， MEKC ? 緩沖溶液中加入離子型表面活性劑，其濃度達(dá)到臨界濃度，形成一疏水內(nèi)核、外部帶負(fù)電的膠束。 ? 無膠篩分技術(shù)：采用低粘度的線性聚合物溶液代替高粘度交聯(lián)聚丙烯酰胺。 ? 常用于蛋白質(zhì)、 DNA等的分離，是 DAN排序的重要手段。 ? 其具有多孔性，類似分子篩的作用，試樣分子按大小分離。 是最基本、應(yīng)用廣的分離模式 毛細(xì)管 等電聚焦 電泳（ CIEF， isoelectric focusing electrophoresis） 利用特殊的一種 緩沖液 （ 兩性電解質(zhì) ）在 凝膠 （常用 聚丙烯酰胺凝膠 ）內(nèi)制造一個 pH梯度， 電泳 時每種 蛋白質(zhì) 就將 遷移 到等于其 等電點(diǎn) （ pI）的 pH處（此時此蛋白質(zhì)不再帶有凈的正或負(fù) 電荷 ），形成一個很窄的區(qū)帶，也同時達(dá)到濃縮的作用。該技術(shù)在生物大分子、無機(jī)離子、光學(xué)異構(gòu)體及有機(jī)藥物分離、分析方面獲得了廣泛的應(yīng)用 。高效毛細(xì)管電泳在 蛋白質(zhì)分析中的應(yīng)用 北京華陽利民儀器有限公司 Beijing huayanglimin Instrument Co.,Ltd 網(wǎng)址： . Email: 一、概述 隨著現(xiàn)代生物技術(shù)的不斷發(fā)展 及各種新型蛋白質(zhì)類生化藥物的相繼問
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