毛細(xì)管電泳技術(shù)及應(yīng)用(2)-文庫(kù)吧資料
2025-05-23 11:51本頁(yè)面
【正文】 jection 10 kV, 5 s. 014 16 18 20 22 24Time (min)Absorbance14 16 18 20 22 24Time (min)Absorbance014 16 18 20 22 24Time (min)AbsorbanceC A B Effect of injection mode (A)Conditioning of the capillary with a low pH buffer containing CTAB, and injection of a long water plug into the capillary by pressure。 Applied potential: 30 kV。 3）毛細(xì)管電泳的進(jìn)樣方式 進(jìn)樣量：毛細(xì)管長(zhǎng)度的 1%2%； nL級(jí)、非常??； 1. 流體力學(xué)進(jìn)樣方式 （ 1）進(jìn)樣端加壓 （ 2）出口端抽真空 （ 3）虹吸進(jìn)樣 tLPd?128π4??進(jìn)樣體積 毛細(xì)管一端插入樣品瓶，加電壓； 2. 電動(dòng)進(jìn)樣方式 tL ctrVefeo2π)?? ??（進(jìn)樣量 進(jìn)樣不均 ：電歧視現(xiàn)象，淌度大的離子比淌度小的進(jìn)樣量大； 離子丟失 ：淌度大且與電滲流方向相反的離子可能進(jìn)不去； 特別適合黏度大的試樣 ； 3. 擴(kuò)散進(jìn)樣 試樣通過(guò)擴(kuò)散作用進(jìn)入分離柱端口處。 因此對(duì)于精確分析 ， 每分析五次后需更換一次樣品盤中的緩沖液 。 上一步清洗過(guò)程結(jié)束后 ， 毛細(xì)管和電極從清洗液中移至電泳緩沖液 ， 不可避免地將強(qiáng)堿或強(qiáng)酸等溶液帶至其中 。 在進(jìn)行每次分析前可用相當(dāng)于毛細(xì)管總體積 2~3倍的 溶液清洗一遍 ， 一般為 2~3 min， 而后注入電泳緩沖液 ， 以保證分析結(jié)果的重復(fù)性 。 1).清洗毛細(xì)管 對(duì)于一根新的或久未使用的毛細(xì)管 ， 需用 1mol/L的NaOH溶液 、 、 超純水依次清洗 。 實(shí)際操作時(shí)，保持毛細(xì)管兩端緩沖溶液 平面高度相同 。 （ 1）電分散作用對(duì)譜帶展寬的影響 當(dāng)溶質(zhì)區(qū)帶與緩沖溶液區(qū)帶的電導(dǎo)不同時(shí)，也造成譜帶展寬；盡量選擇與試樣淌度相匹配的背景電解質(zhì)溶液。 細(xì)內(nèi)徑毛細(xì)管柱，一方面有利于散熱，另一方面比表面積大，又增加了溶質(zhì)吸附的機(jī)會(huì)。 電泳過(guò)程產(chǎn)生的焦耳熱可由下式計(jì)算： 22π EcΛLrIVQbm????m— 電解質(zhì)溶液的摩爾電導(dǎo)； I— 工作電流： cm— 電解質(zhì)濃度； 散熱過(guò)程中，在毛細(xì)管內(nèi)形成溫度梯度（中心溫度高），破壞了塞流，導(dǎo)致區(qū)帶展寬 。 當(dāng)進(jìn)樣塞長(zhǎng)度太大時(shí)，引起的峰展寬大于縱向擴(kuò)散。分離度可按譜圖直接由下式計(jì)算： 221 apap ??? ??平均1212 )(2WWttR???影響分離效率的因素 — 區(qū)帶展寬 在 HPCE中，縱向擴(kuò)散引起的峰展寬： σ 2=2Dt 由擴(kuò)散系數(shù)和遷移時(shí)間決定。22 ???????????YtnDELDLVLn Refapefap ?? 擴(kuò)散系數(shù)小的溶質(zhì)比擴(kuò)散系數(shù)大的分離效率高，分離生物大分子的依據(jù)。有關(guān)色譜理論也適用。 (effective mobility)μef 實(shí)際溶液中的淌度 (實(shí)驗(yàn)中測(cè)定的 )。 (absolute mobility)μab 無(wú)限稀釋溶液中帶電離子在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的平均遷移速度，簡(jiǎn)稱淌度。 （ 3）加入表面活性劑，可改變電滲流的大小和方向； 加入陰離子表面活性劑，如十二烷基硫酸鈉（ SDS），可以使壁表面負(fù)電荷增加， zeta電勢(shì)增大，電滲流增大； 加入不同陽(yáng)離子表面活性劑來(lái)控制電滲流。溫度每變化 1，將引起背景電解質(zhì)溶液黏度變化2%～ 3%； 5. 添加劑的影響 （ 1）加入濃度較大的中性鹽，如 K2SO4，溶液離子強(qiáng)度增大，使溶液的黏度增大，電滲流減小。 4. 溫度的影響 毛細(xì)管內(nèi)溫度的升高，使溶液的黏度下降，電滲流增大。 緩沖溶液離子強(qiáng)度，影響雙電層的厚度、溶液黏度和工作電流，明顯影響電滲流大小。分析時(shí)，采用緩沖溶液來(lái)保持 pH穩(wěn)定。 CE中影響電滲流的因素 電滲流速度和電場(chǎng)強(qiáng)度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長(zhǎng)度一定時(shí)，電滲流速度正比于工作電壓。 4. CE中電滲流的流形 電荷均勻分布，整體移動(dòng)， 電滲流的流動(dòng)為平流 ， 塞式流動(dòng) （譜帶展寬很?。?； 液相色譜中的溶液流動(dòng)為層流， 拋物線流型 ，管壁處流速為零，管中心處的速度為平均速度的 2倍（引起譜帶展寬較大）。 CE中電滲流的方向 電滲流的方向取決于毛細(xì)管內(nèi)表面電荷的性質(zhì)： 內(nèi)表面帶負(fù)電荷，溶液帶正電荷，電滲流流向負(fù)極； 內(nèi)表面帶正負(fù)電荷，溶液帶負(fù)電荷，電滲流流向正極； 石英毛細(xì)管；帶負(fù)電荷，電滲流流向陰極； 改變電滲流方向的方法： （ 1）毛細(xì)管改性 表面鍵合陽(yáng)離子基團(tuán)； （ 2）加電滲流反轉(zhuǎn)劑 內(nèi)充液中加入大量的陽(yáng)離子表面活性劑，將使石英毛細(xì)管壁帶正電荷，溶液表面帶負(fù)電荷。即 ν 電滲流 = μ E 電滲淌度取決于電泳介質(zhì)及雙電層的 Zeta電勢(shì)，即 μ = ε 0εξ ε 0— 真空介電常數(shù)； ε — 介電常數(shù)； ξ — 毛細(xì)管壁的 Zeta電勢(shì)。 在高電場(chǎng)的作用下，帶正電荷的溶液表面及擴(kuò)散層向陰極移動(dòng)，由于這些陽(yáng)離子實(shí)際上是溶劑化的，故將引起柱中的溶液整體向負(fù)極移動(dòng)，速度 ν 電滲流 。 電滲現(xiàn)象中整體移動(dòng)著的液體叫
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