毛細(xì)管電泳技術(shù)及應(yīng)用(2)(完整版)
【正文】 ，簡稱 EOF）。 4. CE中電滲流的流形 電荷均勻分布，整體移動(dòng)， 電滲流的流動(dòng)為平流 ， 塞式流動(dòng) （譜帶展寬很?。? 液相色譜中的溶液流動(dòng)為層流， 拋物線流型 ，管壁處流速為零，管中心處的速度為平均速度的 2倍（引起譜帶展寬較大）。 4. 溫度的影響 毛細(xì)管內(nèi)溫度的升高，使溶液的黏度下降，電滲流增大。 (effective mobility)μef 實(shí)際溶液中的淌度 (實(shí)驗(yàn)中測定的 )。 當(dāng)進(jìn)樣塞長度太大時(shí)，引起的峰展寬大于縱向擴(kuò)散。 實(shí)際操作時(shí)，保持毛細(xì)管兩端緩沖溶液 平面高度相同 。 因此對于精確分析 ， 每分析五次后需更換一次樣品盤中的緩沖液 。 (C) Separation voltage is applied. The enantiomers plex with CD and are separated, and the rest of water plug is removed. Schematic diagrams the FAEP 分離模式 八種分離類型，介紹常用的幾種； 根據(jù)試樣性質(zhì)不同，采用不同的分離類型； 每種機(jī)理的選擇性不同； 一、毛細(xì)管區(qū)帶電泳 capillary zone electrophoresis ， CZE 帶電粒子的遷移速度 =電泳和電滲流速度的矢量和。柱便宜、易制備。所有試樣都按前導(dǎo)離子的速度等速向陽極前進(jìn)，逐漸形成各自獨(dú)立的區(qū)帶而分離。 最常用的方法是采用雙官能團(tuán)的偶聯(lián)劑 ， 如各種有機(jī)硅烷 ， 第一個(gè)官能團(tuán) (如甲氧基 )與管壁上的游離羥基進(jìn)行反應(yīng) ， 使其與管壁進(jìn)行共價(jià)結(jié)合 ，再用第二個(gè)官能團(tuán) (如乙烯基 )與涂漬物 (如聚丙烯酰胺 )進(jìn)行反應(yīng) ， 形成一穩(wěn)定的涂層 ． 此外還有將纖維素 、 PEI和聚醚組成多層涂層 ， 親水性的絨毛涂層 (fuzzy)和聯(lián)鎖聚醚涂層 。 迄今為止除了原子吸收光譜與紅外光譜末用于 CE外 ， 其它檢測手段均已用于 CE。 利用 CELIF技術(shù)可檢出染色的單個(gè) DNA分子 ， 有望用于癌癥的早期診斷及臨床酶和免疫學(xué)檢測等 。關(guān)鍵是解決接口裝置 。用 CE— CL檢測血紅蛋白，其檢測限比 CE— UV低約 4個(gè)數(shù)量級。 發(fā)展新型檢測器 、 提高 UV等檢測器靈敏度 ， 以及發(fā)展 CE和其它分離方法 、 檢測方法的聯(lián)用是 CE研究重點(diǎn)之一 。電致化學(xué)發(fā)光 (ECL)也已成功地用作CE檢測。 CE/MS聯(lián)用特別適合于復(fù)雜生物體系的分離鑒定 。 采用波長分辨熒光檢測器可提供有關(guān)蛋白和 DNA序列的一些結(jié)構(gòu)和動(dòng)態(tài)信息 。 1) 紫外檢測器 (UV) 在合適位置除去涂層 ， 將透明部分對準(zhǔn)光路 。 測定蛋白質(zhì)和肽的分子量常用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺電泳 (SDSLPAGE)。 五、毛細(xì)管等速電泳 Capillary isotachophoresis ， CITP 3. 不同離子的淌度不同，所形成區(qū)帶的電場強(qiáng)度不同(ν =μ E)，淌度大的離子區(qū)帶電場強(qiáng)度?。? 沿出口到進(jìn)口，將不同區(qū)帶依次排序 4? ? ? ?電場強(qiáng)度依次增大。 三、 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜 （ MEKC） Micellar electrokiic capillary chromatography， MEKC 在電場力的作用下，膠束在柱中移動(dòng)。 最基本、應(yīng)用廣的分離模式； 二、毛細(xì)管凝膠電泳 capillary gel electrophoresis ， CGE 將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。 3）毛細(xì)管電泳的進(jìn)樣方式 進(jìn)樣量：毛細(xì)管長度的 1%2%； nL級、非常??； 1. 流體力學(xué)進(jìn)樣方式 （ 1）進(jìn)樣端加壓 （ 2）出口端抽真空 （ 3）虹吸進(jìn)樣 tLPd?128π4??進(jìn)樣體積 毛細(xì)管一端插入樣品瓶，加電壓； 2. 電動(dòng)進(jìn)樣方式 tL ctrVefeo2π)?? ??（進(jìn)樣量 進(jìn)樣不均 ：電歧視現(xiàn)象，淌度大的離子比淌度小的進(jìn)樣量大； 離子丟失 ：淌度大且與電滲流方向相反的離子可能進(jìn)不去； 特別適合黏度大的試樣 ； 3. 擴(kuò)散進(jìn)樣 試樣通過擴(kuò)散作用進(jìn)入分離柱端口處。 1).清洗毛細(xì)管 對于一根新的或久未使用的毛細(xì)管 ， 需用 1mol/L的NaOH溶液 、 、 超純水依次清洗 。 電泳過程產(chǎn)生的焦耳熱可由下式計(jì)算： 22π EcΛLrIVQbm????m— 電解質(zhì)溶液的摩爾電導(dǎo)； I— 工作電流： cm— 電解質(zhì)濃度； 散熱過程中，在毛細(xì)管內(nèi)形成溫度梯度（中心溫度高），破壞了塞流，導(dǎo)致區(qū)帶展寬 。有關(guān)色譜理論也適用。溫度每變化 1，將引起背景電解質(zhì)溶液黏度變化2%～ 3%； 5. 添加劑的影響 （ 1）加入濃度較大的中性鹽，如 K2SO4，溶液離子強(qiáng)度增大，使溶液的黏度增大，電滲流減小。 CE中影響電滲流的因素 電滲流速度和電場強(qiáng)度成正比，當(dāng)毛細(xì)管長度一定時(shí)，電滲流速度正比于工作電壓。 在高電場的作用下，帶正電荷的溶液表面及擴(kuò)散層向陰極移動(dòng)，由于這些陽離子實(shí)際上是溶劑化的，故將引起柱中的溶液整體向負(fù)極移動(dòng)，速度 ν 電滲流 。 ν 電滲流 ν 電泳 時(shí) ,陰離子在負(fù)極最后流出 ?除中性粒子外 ,同種類離子由于受到的電場力大小不一樣也同時(shí)被相互分離 。 按 形狀分類 ： U型管電泳、柱狀電泳、板電泳； 按 載體分類 ：濾紙電泳、瓊脂電泳、聚丙烯酰胺電泳、自由電泳； 傳統(tǒng)電泳分析：操作煩瑣，分離效率低，定量困難，無法與其他分析相比。 1937年， Tiselius（瑞典） 用于 人血清蛋白質(zhì)混合液的分離： 發(fā)現(xiàn) 樣品的遷移速度和方向由其電荷和淌度決定 ； 第一次 的 自由溶液電泳； 第一臺電泳儀 ； 1948年， 獲
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