毛細(xì)管電泳技術(shù)及應(yīng)用(2)(參考版)
2025-05-19 11:51本頁(yè)面
【正文】 發(fā)展新型檢測(cè)器 、 提高 UV等檢測(cè)器靈敏度 ， 以及發(fā)展 CE和其它分離方法 、 檢測(cè)方法的聯(lián)用是 CE研究重點(diǎn)之一 。 總之 ， 檢測(cè)器是 CE中具有挑戰(zhàn)性的研究工作 。 普通熒光檢測(cè)器研究集中在開發(fā)新的熒光染料 ， 以提高靈敏度 。電致化學(xué)發(fā)光 (ECL)也已成功地用作CE檢測(cè)。用 CE— CL檢測(cè)血紅蛋白，其檢測(cè)限比 CE— UV低約 4個(gè)數(shù)量級(jí)?？捎妹}沖伏安法測(cè)定糖 、 糖肽及金屬離子 ， 也可用循環(huán)伏安法 ， 另一類常用的 EC為 電導(dǎo)檢測(cè)器 ， Li＋的檢測(cè)限達(dá) 107mol/L(1015mol)。 4) 電化學(xué)檢測(cè)器（ EC） EC可避免光學(xué)類檢測(cè)器遇到的光程太短的問(wèn)題 ， 故和 LIF同為 CE中靈敏度最高的檢測(cè)器 。 CE/MS聯(lián)用特別適合于復(fù)雜生物體系的分離鑒定 。關(guān)鍵是解決接口裝置 。 3). CE/MS聯(lián)用 CE/MS聯(lián)用 ,彌補(bǔ)了 CE定性鑒定的不足 ， 故發(fā)展特別快 。 CE/LIF向三個(gè)方向發(fā)展： 在原有氦 — 鎘激光器 (325nm)和氬離子激光器(488nm)之外 ， 發(fā)展價(jià)廉 、 長(zhǎng)波長(zhǎng)的二極管激光器 ； 發(fā)展更多的熒光標(biāo)記試劑來(lái)擴(kuò)展應(yīng)用面 ； 開展更多的應(yīng)用研究 。 采用波長(zhǎng)分辨熒光檢測(cè)器可提供有關(guān)蛋白和 DNA序列的一些結(jié)構(gòu)和動(dòng)態(tài)信息 。 利用 CELIF技術(shù)可檢出染色的單個(gè) DNA分子 ， 有望用于癌癥的早期診斷及臨床酶和免疫學(xué)檢測(cè)等 。 總體來(lái)說(shuō)進(jìn)展不大 。 或采用平面積分檢測(cè)池 ，這種設(shè)計(jì)可使檢測(cè)光路增加到 1cm。 1) 紫外檢測(cè)器 (UV) 在合適位置除去涂層 ， 將透明部分對(duì)準(zhǔn)光路 。 迄今為止除了原子吸收光譜與紅外光譜末用于 CE外 ， 其它檢測(cè)手段均已用于 CE。 填充柱 ：可將 HPLC中眾多的固定相微粒填充到毛細(xì)管中 。 此法簡(jiǎn)單 ， 使用方便 ， 分離能力比 CGE差 。 測(cè)定蛋白質(zhì)和肽的分子量常用十二烷基硫酸鈉聚丙烯酰胺電泳 (SDSLPAGE)。 最常用的方法是采用雙官能團(tuán)的偶聯(lián)劑 ， 如各種有機(jī)硅烷 ， 第一個(gè)官能團(tuán) (如甲氧基 )與管壁上的游離羥基進(jìn)行反應(yīng) ， 使其與管壁進(jìn)行共價(jià)結(jié)合 ，再用第二個(gè)官能團(tuán) (如乙烯基 )與涂漬物 (如聚丙烯酰胺 )進(jìn)行反應(yīng) ， 形成一穩(wěn)定的涂層 ． 此外還有將纖維素 、 PEI和聚醚組成多層涂層 ， 親水性的絨毛涂層 (fuzzy)和聯(lián)鎖聚醚涂層 。動(dòng)態(tài)修飾采用在運(yùn)行緩沖液中加入添加劑，如加入陽(yáng)離子表面活性劑十四烷基三甲基溴化銨 (TTAB)，能在內(nèi)壁形成物理吸附層，使EOF反向．添加劑還有聚胺、聚乙烯亞胺 (PEI)等，甲基纖維素 (MC)可形成一中性親水性覆蓋層。 六、毛細(xì)管電動(dòng)色譜 Capillary electrokiic chromatography ， CEC 七、毛細(xì)管微乳電動(dòng)色譜 (Microemulsion electrokiic chromatography, MEEKC) Water nOctane SO3 SO3 OH OH OH OH OH Na+ Na+ Water Na+ SO3 Water Butan1ol SDS Sodium ion OH CE相關(guān)技術(shù) 毛細(xì)管是 CE的核心部件之一 ． 早期研究集中在毛細(xì)管直徑 、 長(zhǎng)度 、 形狀和材料方面 ， 目前集中在管壁的改性和各種柱的制備 。 五、毛細(xì)管等速電泳 Capillary isotachophoresis ， CITP 3. 不同離子的淌度不同，所形成區(qū)帶的電場(chǎng)強(qiáng)度不同(ν =μ E)，淌度大的離子區(qū)帶電場(chǎng)強(qiáng)度??； 沿出口到進(jìn)口，將不同區(qū)帶依次排序 4? ? ? ?電場(chǎng)強(qiáng)度依次增大。所有試樣都按前導(dǎo)離子的速度等速向陽(yáng)極前進(jìn)，逐漸形成各自獨(dú)立的區(qū)帶而分離。 1. 將兩種淌度差別很大的緩沖液分別作為前導(dǎo)離子 (充滿毛細(xì)管 )和尾隨離子，試樣離子的淌度全部位于兩者之間，并以同一速度移動(dòng)。 （水相）間分配，疏水性強(qiáng)的組分與膠束結(jié)合的較牢，流出時(shí)間長(zhǎng)； ，擴(kuò)展了高效毛細(xì)管電泳的應(yīng)用范圍 ； 1. 根據(jù)等電點(diǎn)差別分離生物大分子的高分辨率電泳技術(shù)； 2. 毛細(xì)管內(nèi)充有兩性電解質(zhì)（合成的具有不同等電點(diǎn)范圍的脂肪族多胺基多羧酸混合物），當(dāng)施加直流電壓（ 6～ 8V）時(shí)，管內(nèi)將建立一個(gè)由陽(yáng)極到陰極逐步升高的 pH梯度； 3. 氨基酸、蛋白質(zhì)、多肽等的所帶電荷與溶液 pH有關(guān)，在酸性溶液中帶正電荷，反之帶負(fù)電荷。 三、 膠束電動(dòng)毛細(xì)管色譜 （ MEKC） Micellar electrokiic capillary chromatography， MEKC 在電場(chǎng)力的作用下，膠束在柱中移動(dòng)。柱便宜、易制備。 特點(diǎn) ：抗對(duì)流性好，散熱性好，分離度極高。能夠有效減小組分?jǐn)U散，所得峰型尖銳，分離效率高。 最基本、應(yīng)用廣的分離模式； 二、毛細(xì)管凝膠電泳 capillary gel electrophoresis ， CGE 將聚丙烯酰胺等在毛細(xì)管柱內(nèi)交聯(lián)生成凝膠。 (C) Separation voltage is applied. The enantiomers plex with CD and are separated, and the rest of water plug is removed. Schematic diagrams the FAEP 分離模式 八種分離類型，介紹常用的幾種； 根據(jù)試樣性質(zhì)不同，采用不同的分離類型； 每種機(jī)理的選擇性不同； 一、毛細(xì)管區(qū)帶電泳 capillary zone electrophoresis ， CZE 帶電粒子的遷移速度 =電泳和電滲流速度的矢量和。 ? (A) Pressure injection psi., 5 s, ? (B) (C) electrokiic in
環(huán)評(píng)公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號(hào)-1