毛細管電泳技術及應用(2)-資料下載頁
2025-05-15 11:51本頁面
【正文】 溶液中的交聯(lián)劑甲叉雙丙烯酰胺 (Bis)濃度降為零 ， 得到線性非交聯(lián)的親水性聚合物用作操作溶液 ， 仍有按分子大小分離的作用 ， 稱無膠篩分 。 此法簡單 ， 使用方便 ， 分離能力比 CGE差 。 4) CEC的毛細管柱制備 包括開管和填充柱 開管柱 ：鍵合色譜涂層毛細管柱 ， 例如：將核糖核酸酶 、 己糖激酶 、 腺苷脫氨酶等固定到毛細管表面 ， 構成一開管反應器 ， 再和 CE連接 ， 可進行核酸選擇性檢測 、 微量在線合成和分離寡核昔酸等工作 。 填充柱 ：可將 HPLC中眾多的固定相微粒填充到毛細管中 。 CE對檢測器靈敏度要求相當高 ， 故檢測是 CE中的關鍵問題 。 迄今為止除了原子吸收光譜與紅外光譜末用于 CE外 ， 其它檢測手段均已用于 CE。 現(xiàn)選擇重要的幾類檢測器介紹其最新進展 。 1) 紫外檢測器 (UV) 在合適位置除去涂層 ， 將透明部分對準光路 。 UV檢測器集中在提高靈敏度 ， 可采用毛細管彎折 、 吹泡技術擴大光路 。 或采用平面積分檢測池 ，這種設計可使檢測光路增加到 1cm。 也有用光散射二極管 (LEDS)作光源 ， 其線性范圍和信噪比優(yōu)于汞燈 。 總體來說進展不大 。 2) 激光誘導熒光檢測 [LIF] LIF是 CE最靈敏的檢測器之一 ， 極大地拓展了 CE的應用 ， DNA測序就須用 LIF， 單細胞和單分子檢測也離不開 LIF。 利用 CELIF技術可檢出染色的單個 DNA分子 ， 有望用于癌癥的早期診斷及臨床酶和免疫學檢測等 。 CE／ LIF和微透析結合可測定腦中神經(jīng)肽 。 采用波長分辨熒光檢測器可提供有關蛋白和 DNA序列的一些結構和動態(tài)信息 。 一些適用于二極管激光器的熒光標記試劑如 CY— 5等 ， 正在不斷開發(fā)和應用 。 CE/LIF向三個方向發(fā)展： 在原有氦 — 鎘激光器 (325nm)和氬離子激光器(488nm)之外 ， 發(fā)展價廉 、 長波長的二極管激光器 ； 發(fā)展更多的熒光標記試劑來擴展應用面 ； 開展更多的應用研究 。 LIF不但提高了靈敏度，也可增加選擇性， 缺點 在于被測物須用熒光試劑標記成染色。 3). CE/MS聯(lián)用 CE/MS聯(lián)用 ,彌補了 CE定性鑒定的不足 ， 故發(fā)展特別快 。 CE/MS聯(lián)用主要在兩方面發(fā)展： 一是各種 CE模式和 MS聯(lián)用 ， 二是 CE和各種 MS聯(lián)用 。關鍵是解決接口裝置 。 最早報道 CE/MS聯(lián)用是采用單級四極桿質(zhì)譜 ， 現(xiàn)已發(fā)展到三級四極質(zhì)譜 、 離子阱質(zhì)譜等 。 CE/MS聯(lián)用特別適合于復雜生物體系的分離鑒定 。 因所需樣品少 ， 目前大部分工作集中在基因工程產(chǎn)品和蛋白樣品 ， CE/MS聯(lián)用現(xiàn)在已成為CE研究中的熱點 。 4) 電化學檢測器（ EC） EC可避免光學類檢測器遇到的光程太短的問題 ， 故和 LIF同為 CE中靈敏度最高的檢測器 。 報道最多的是 電化學伏安檢測器 ， 常用碳纖維微電極進行單細胞極微量神經(jīng)遞質(zhì) (如多巴胺等 )的測定 ?？捎妹}沖伏安法測定糖 、 糖肽及金屬離子 ， 也可用循環(huán)伏安法 ， 另一類常用的 EC為 電導檢測器 ， Li＋的檢測限達 107mol/L(1015mol)。 5) 化學發(fā)光檢測器 (CL) CL具有結構簡單、靈敏度高的特點，近年來引起重視。用 CE— CL檢測血紅蛋白，其檢測限比 CE— UV低約 4個數(shù)量級。應用最多的仍是 魯米那 (luminol)體系 ，因為該體系對多數(shù)待測物如一些金屬離子、氨基酸及其衍生物的檢測靈敏度很高，且反應在水相進行。電致化學發(fā)光 (ECL)也已成功地用作CE檢測。 6) 其它檢測器 采用激光作激勵源的除 LIF外 ， 還有激光熱透鏡檢測 、 激光光熱檢測和激光拉曼檢測等 。 普通熒光檢測器研究集中在開發(fā)新的熒光染料 ， 以提高靈敏度 。 同位素檢測器具有高選擇性和高靈敏度〔 可達 109加 mol/L〕 ， 但測定時需經(jīng)同位素標記步驟 ， 故應用受到限制 。 總之 ， 檢測器是 CE中具有挑戰(zhàn)性的研究工作 。 CE/MS聯(lián)用是最有應用價值的檢測器 ， 但價格昂貴 ， 不易推廣 。 發(fā)展新型檢測器 、 提高 UV等檢測器靈敏度 ， 以及發(fā)展 CE和其它分離方法 、 檢測方法的聯(lián)用是 CE研究重點之一 。 Light source () (+) buffer buffer 毛細管電泳 — 間接紫外檢測法 測定植物中的低分子量有機酸 + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + + EOF + 莧菜根、莖、葉樣品溶液電泳圖 1 甲酸 2 蘋果酸 3 檸檬酸 4 琥珀酸 5 戊二酸 6 未知峰 7 乙酸
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