電泳技術(shù)和常用電泳儀(ppt-48)(完整版)
【正文】 率 （六）吸附作用 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 一、電泳技術(shù)的分類 （一）根據(jù)工作原理的不同：可分為移界電泳、區(qū)帶電泳、等速電泳、等電聚焦電泳、免疫電泳等。利用電泳現(xiàn)象將多組分物質(zhì)分離、分析的技術(shù)叫做電泳技術(shù)（ electrophoresis technique）。但是在一定的物理作用或化學(xué)反應(yīng)條件下，某些物質(zhì)分子會(huì)成為帶電的離子（或粒子），不同的物質(zhì)，由于其帶電性質(zhì)、顆粒形狀和大小不同，因而在一定的電場 中它們的移動(dòng)方向和移 動(dòng)速度也不同，因此可 使它們分離。 2. 恒流電泳 。 0602 平臥式電泳槽裝置示意圖 將濾紙條水平地架設(shè)在兩個(gè)裝有緩沖溶液的容器之間，樣品點(diǎn)于濾紙中央。 它具有機(jī)械強(qiáng)度好、彈性大、 透明、化學(xué)穩(wěn)定性高、無電滲 作用、設(shè)備簡單、樣品量小 (1～ 100μg ） 、分辨率高等優(yōu)點(diǎn)。 前導(dǎo)電解質(zhì)的遷移率高于任何樣品組分 ， 后者則低于任何樣品組分 ， 被分離的組分按其不同的遷移率夾在中間 ， 在強(qiáng)電場的作用下 ， 各被分離組分在前導(dǎo)電解質(zhì)與尾隨電解 質(zhì)之間的空隙中移動(dòng) ， 實(shí)現(xiàn)分離 。根據(jù)組分的遷移時(shí)間 進(jìn)行定性，根據(jù)電泳峰 的峰面積或峰高進(jìn)行定 量分析。毛細(xì)管的等電聚焦是在毛細(xì)管內(nèi)實(shí)現(xiàn)的等電聚焦過程，具有極高的分辨率，通?？梢苑蛛x等電點(diǎn)差異小于 ，例如肽類、蛋白質(zhì)的分離。只需將樣品、試劑、電泳片放好，人員可離機(jī)完成實(shí)驗(yàn)并得到結(jié)果。這是目前所有電泳技術(shù)中分辨率最高，信息量最多的技術(shù)，已成為分析復(fù)雜蛋白混合物的基本工具。許多疾病總血清蛋白濃度和各蛋白組分的比例有所改變，通過血清蛋白電泳圖譜能幫助我們對(duì)某些疾病進(jìn)行診斷及鑒別診斷。 1．乳酸脫氫酶 (LD/LDH)同工酶： 2．肌酸激酶（ CK）同工酶： 3． CK同工酶亞型： 0621 同工酶電泳圖譜 第五節(jié) 電泳儀的臨床應(yīng)用 六、脂蛋白電泳 脂蛋白電泳檢測各種脂蛋白（包括膽固醇和甘油三酯）主要用于高脂血癥的分型、冠心病危險(xiǎn)性估計(jì)，以及動(dòng)脈粥樣硬化性及相關(guān)疾病的發(fā)生、發(fā)展、診斷和治療（包括治療性生活方式改變、飲食及調(diào)脂藥物冶療）效果觀察的研究等。 當(dāng)不能進(jìn)行腎活檢時(shí) ，尿蛋白電泳結(jié)果能 很好地協(xié)助臨床判斷 腎臟的主要損害。高效毛細(xì)管電泳是一種迅速發(fā)展的分離技術(shù)，儀器簡單、操作簡便、分析速度快、分離效率高、操作模式多、開發(fā)分析方法容易、實(shí)驗(yàn)成本低、消耗少、應(yīng)用范圍極廣。只需將樣品、試劑、瓊脂糖凝膠電泳膠片放好后，操作人員可離機(jī)完成實(shí)驗(yàn)并得到結(jié)果。 第四節(jié) 毛細(xì)管電泳的基本結(jié)構(gòu)和分離模式 （六）毛細(xì)管電色譜 它包含了電泳和色譜兩種機(jī)制，是在毛細(xì)管中填充 或在毛細(xì)管壁 上鍵合（或涂壁）固 定相，從而構(gòu)成毛細(xì) 管色譜柱，依靠電滲 流推動(dòng)流動(dòng)相，攜帶 樣品遷移，根據(jù)樣品 分子的質(zhì)荷比、分子 尺寸及分配系數(shù)的差 別而分離。凝膠具有多孔性，起類似分子篩的作用，能根據(jù)待測組分的質(zhì)荷比和分子體積的不同而進(jìn)行分離。 第二向采用了十二烷基硫酸鈉一聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ SDSPAGE） 就是按蛋白質(zhì)分子量的大小使其在垂直方向進(jìn)行分離 。 將等電點(diǎn)不同的蛋白質(zhì)混合物加入有 pH值梯度的凝膠介質(zhì)中，在電場內(nèi)經(jīng)過一段時(shí)間后，各組分將分別聚焦在各自等電點(diǎn)相應(yīng)的 pH值位置上，最后，樣品的各組分在各自的等電點(diǎn)聚焦成一條清晰而穩(wěn)定的窄帶。 第二節(jié) 常用電泳技術(shù)和電泳方法 （二）醋酸纖維素薄膜電泳 電泳時(shí)經(jīng)過膜的預(yù)處理、加樣、電泳、染色、脫色與透明即可得到滿意的分離效果。
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