電泳技術(shù)方王楷ppt課件-閱讀頁(yè)
2025-05-16 18:13本頁(yè)面
【正文】 上標(biāo)記記號(hào)）。 2 、 電泳 將膜無(wú)光澤面向下，點(diǎn)樣端置于陰極，膜與電極緊密 接觸（ 不能留有氣泡 ），平衡 5min 。 3 、染色 電泳結(jié)束，將膜放入氨基黑 10B 染色， 3min 后取出， 漂洗，反復(fù)幾次，至背景漂凈為止。 4 、定量 1 ） 取 6 支試管并編號(hào) ， 分別 加入 N 氫 氧 化 鈉 4 ml 。 3 ） 光 光度計(jì) 比色 ， 波長(zhǎng) 為 650 nm ， 以 空白 薄膜 條 洗 出 液 為 空白 對(duì)照 ， 讀取 其它 5 管 的 光 密度 值 。 蛋白質(zhì)名稱 等電點(diǎn) 分子量 清蛋白 69000 α α1－ 202200 α2－ 300000 β 90000 － 150000 γ － 156000 － 300000 血清在 p H8 . 6 的緩沖體系中電泳 1h 左右 ， 染色 后 可 顯示 5條 帶 。 等 電 聚 焦 電 泳 不同物質(zhì)由于帶電性質(zhì)不同，因而在一定的電場(chǎng)強(qiáng)度下移動(dòng)的方向和速度不同 ,可以進(jìn)行分離。 當(dāng)?shù)鞍踪|(zhì)溶液處于某一 pH時(shí)，蛋白質(zhì)解離成正、負(fù)離子的趨勢(shì)相等，成為兼性離子，凈電位為零，此時(shí)溶液的 pH稱為蛋白質(zhì)的等電點(diǎn)。 因?yàn)?A m p h o l i n e 形成的 pH 梯度是一較平滑的穩(wěn)定的 pH 梯度，從理論上講，只要蛋白質(zhì)的 pI 相差 0 . 0 1 就可分離。 操作步驟及注意要點(diǎn) 凝膠配制 ： a 取 10 ，從一端量出 7cm作好標(biāo)記，用橡皮片封底（ 用兩條橡皮圈扎緊 ），垂直放置。 c 立即用 5ml注射器配針頭注入約 ，垂直放置（ 將長(zhǎng)滴管及時(shí)清洗 ） 注意：丙烯酰胺和甲叉雙丙烯酰胺是神經(jīng)毒劑，對(duì)皮膚有刺激作用，注意避免直接接觸。上槽注入 5%H3PO4， 下槽注入 2%NaOH，檢查凝膠管上下口內(nèi)有無(wú)氣泡 ，如有必須排除。 剝 膠 用帶有針頭的注射器吸入蒸餾水，將針頭插入凝膠與水之間，使針頭慢慢螺旋前進(jìn)。 測(cè) 量 樣 品 pI 直接用 pH試紙插入所需測(cè)定的蛋白區(qū)帶中測(cè)量
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