瓊脂糖凝膠電泳技術侯云鵬-閱讀頁
2024-08-23 22:45本頁面
【正文】 的藍色的條帶是溴酚藍，代表的片段大小是 300bp，后面的有點綠色的條帶是二甲苯青，代表的片段大小在 4000bp左右。第一，里邊的指示劑溴酚藍和二甲苯酚起到指示的作用，顯示電泳的進程，以便我們適時終止電泳；第二，里邊的成分甘油可以加大樣品密度，使樣品密度大于 TAE，從而沉降到點樣孔中，防止樣品飄出點樣孔。 SDS主要是促使聚合酶變性，因為沒有除盡的聚合酶會結合在 DNA雙鏈上影響它的遷移速率。 ② 制膠 ：待熔化的膠溫度降到 60℃ 以下后，將膠倒進插了梳子的膠盒中。 ③ 制樣 ：根據(jù)上樣緩沖液的濃度加樣，如 6 loading buffer,則 1ul loading buffer +5 ul DNA sample，類推。 ⑤接通電源，紅色為正極，黑色為負極， DNA往正極移動，15V/cm。將電壓調到零，關機，再取出凝膠， EB染色 1020分鐘，紫外燈下觀察，照相。 ②電泳儀有電壓不一定標志電泳槽已經接通，應該觀察正負極鉑金絲是否有氣泡出現(xiàn)，如負極的氣泡比正極的多一倍，表示電泳槽已接通電源，幾分鐘后可見指示劑溴酚藍向正極移動。 ④凝膠中加入 EB 進行電泳，便于隨時紫外線下觀察電泳狀態(tài)，但 EB會導致線性 DNA遷移率下降 1
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