電泳技術及其在分子生物學中的應用-在線瀏覽
2025-03-05 19:44本頁面
【正文】 agrose gel electrophoresis ） 聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ polyacrylamide gel electrophoresis， PAGE） 凝膠電泳 用于分離、鑒定和純化 DNA片段 重點內容 影響 DNA在瓊脂糖凝膠中的遷移速率的因素有哪些？ Western blotting 的基本實驗步驟 ,及每一步的操作意義 . 瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖（ agarose）是由瓊脂分離制備的鏈狀多糖。許多瓊脂糖鏈依氫鍵及其它力的作用使其互相盤繞形成繩狀瓊脂糖束，構成直徑從 50nm到略大于 200nm的三維篩孔的通道。 緩沖液系統(tǒng) 常用的電泳緩沖液有 EDTA（ ）和 Tris乙酸（ TAE）， Tris硼酸（ TBE）或 Tris磷酸（ TPE）等，濃度約為 50mmol/L(~)。 電泳 低電壓下，分離效果較好。 因此，為了獲得電泳分離 DNA片段的最大分辨率，所用電壓不宜高于 5V/cm。 染色和拍照 常用熒光染料溴化乙錠（ EB）染色，在紫外光下觀察 DNA條帶，用紫外分析儀拍照，或用凝膠成像系統(tǒng)輸出照片，并進行有關的數(shù)據(jù)分析。 可用于檢測單鏈或雙鏈核酸（ DNA和 RNA）。 雙鏈 DNA分子在凝膠基質遷移的速率與堿基對數(shù)目的常用對數(shù)成反比。當凝膠濃度太高時，凝膠孔徑變小，環(huán)狀 DNA（球形）不能進入膠中，相對遷移率為 0，而同等大小的直線 DNA（剛性棒狀）可以按長軸方向前移，相對遷移率大于 0。 ? 所用的電壓 ：低電壓時， DNA片段遷移率與所用的電壓成正比；電場強度升高時，高分子質量片段的遷移率遂不成比例的增加； ? 電泳緩沖液 ：組成和離子強度 。一四甲基乙二胺 )和 過硫酸銨的作用下，丙烯酰胺聚合形成長鏈，聚丙烯酰胺鏈在交聯(lián)劑， N， N39。 ?聚丙烯酰胺凝膠一律進行垂直電泳 . 假如 DNA 順序中的某個堿基發(fā)生了突變，使突變所在部位的 DNA 序列產(chǎn)生（或缺失）某種限制性內切酶的位點。這樣，在同種生物的不同個體中會出現(xiàn)不同長度的限制性片段類型，即限制性片段多態(tài)性 (Restriction Fragment Length Polymorphi
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鄂ICP備17016276號-1