電泳技術(shù)及其在分子生物學(xué)中的應(yīng)用(已修改)
2025-01-28 19:44 本頁面
【正文】 電泳技術(shù)及其 在分子生物學(xué)中的應(yīng)用 環(huán)境科學(xué)與技術(shù)研究中心 電泳是帶電荷的膠體顆粒在電場(chǎng)中的移動(dòng)。 ? 凈電荷： 生物大分子如蛋白質(zhì)、核酸、多糖等常以顆粒形式分散在溶液中，它們的 凈電荷 取決于介質(zhì)的 H+濃度與其他大分子的相互作用。 ? 在 電場(chǎng) 中，帶電顆粒向陰極或陽極遷移，遷移的方向取決于它們帶電的符號(hào)。 ? 電泳的實(shí)現(xiàn)還依賴于 支持介質(zhì) 的存在。 ?電泳的三要素 以淀粉膠、瓊脂或瓊脂糖凝膠、聚丙烯酰胺凝膠等作為支持介質(zhì)的區(qū)帶電泳法稱為 凝膠電泳 。 瓊脂糖凝膠電泳 （ agrose gel electrophoresis ） 聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ polyacrylamide gel electrophoresis， PAGE） 凝膠電泳 用于分離、鑒定和純化 DNA片段 重點(diǎn)內(nèi)容 影響 DNA在瓊脂糖凝膠中的遷移速率的因素有哪些？ Western blotting 的基本實(shí)驗(yàn)步驟 ,及每一步的操作意義 . 瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖（ agarose）是由瓊脂分離制備的鏈狀多糖。其結(jié)構(gòu)單元是 D半乳糖和 L半乳糖。許多瓊脂糖鏈依氫鍵及其它力的作用使其互相盤繞形成繩狀瓊脂糖束，構(gòu)成直徑從 50nm到略大于 200nm的三維篩孔的通道。 凝膠的制備 以瓊脂糖為溶質(zhì)， 電泳緩沖液 為溶劑，用微波爐加熱，配制 一定濃度 的溶膠，灌入水平膠框，插入 梳子 ，自然冷卻。 緩沖液系統(tǒng) 常用的電泳緩沖液有 EDTA（ ）和 Tris乙酸（ TAE）， Tris硼酸（ TBE）或 Tris磷酸（ TPE）等，濃度約為 50mmol/L(~)。 含不同量瓊脂糖的凝膠的分離范圍 凝膠中的瓊脂糖含量 [%（ w/v） ] 線狀 DNA分子的有效分離范圍（ kb） 560 120 瓊脂糖濃度的選擇 ：根據(jù)被分離 線狀 DNA片斷的大小 樣品配制與加樣 DNA樣品用適量 TrisEDTA緩沖液溶解，緩沖液內(nèi)含有 %溴酚藍(lán)或其他指示染料， 含有 10%15%
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