電泳技術(shù)及其在分子生物學(xué)中的應(yīng)用-文庫吧
2025-01-01 19:44 本頁面
【正文】 蔗糖或 5%~ 10%甘油，以增加其比重，使樣品集中。 電泳 低電壓下，分離效果較好。在低電壓條件下，線性 DNA分子的電泳遷移率與所用的電壓呈正比。 因此，為了獲得電泳分離 DNA片段的最大分辨率，所用電壓不宜高于 5V/cm。 cm ：電場正負(fù)極間的距離。 染色和拍照 常用熒光染料溴化乙錠（ EB）染色，在紫外光下觀察 DNA條帶，用紫外分析儀拍照，或用凝膠成像系統(tǒng)輸出照片，并進(jìn)行有關(guān)的數(shù)據(jù)分析。 瓊脂糖凝膠中 DNA的染色 熒光染料 溴化乙錠（ EB） 含有一個可以嵌入 DNA或 RNA的堆砌堿基之間的一個平面基團(tuán) 與核酸結(jié)合后在紫外線激發(fā)下呈現(xiàn)橘黃色熒光，熒光的位置代表核酸片段所在的位置，熒光的強弱代表核酸量的多少 ,可以檢測到少至 10ng的 DNA條帶。 可用于檢測單鏈或雙鏈核酸（ DNA和 RNA）。 將已知分子量的標(biāo)準(zhǔn) DNA的遷移率對分子量對數(shù)作圖，可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，未知 DNA片段在相同條件下進(jìn)行電泳，根據(jù)它的電泳遷移率即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得其分子量。 雙鏈 DNA分子在凝膠基質(zhì)遷移的速率與堿基對數(shù)目的常用對數(shù)成反比。 雙鏈 DNA分子在凝膠中的 遷移率 ?影響 DNA 在瓊脂糖凝膠中的遷移速率的因素 ?DNA分子的大小 ?瓊脂糖濃度 ； ?DNA的構(gòu)象 ：超螺旋環(huán)狀（ I型）、切口環(huán)狀（ II型）和線狀（ III型）； 共價閉環(huán) DNA＞直線 DNA＞開環(huán)雙鏈 DNA。當(dāng)凝膠濃度太高時，凝膠孔徑變小，環(huán)狀 DNA（球形）不能進(jìn)入膠中，相對遷移率為 0，而同等大小的直線 DNA（剛性棒狀）可以按長軸方向前移，相對遷移率大于 0。 ? 凝膠和電泳緩沖液中的溴化乙錠 。 ? 所用的電壓 ：低電壓時， DNA片段遷移率與所用的電壓成正比；電場強度升高時，高分子質(zhì)量片段的遷移率遂不成比例的增加； ? 電泳緩沖液 ：組成和離子強度 。 聚丙烯酰胺凝膠 聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ polyacrylamide gel electrophoresis，PAGE） 聚丙烯酰胺凝膠是由丙烯酰胺單體，在催化劑 TEMED(N， N， N， N39。一四甲基乙二胺 )和 過硫酸銨的作用下，丙烯酰胺聚合形成長鏈，聚丙烯酰胺鏈在
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