【正文】 體步移（ chromsome walking):長鏈 DNA用核酸內(nèi)切酶進(jìn)行部分切割，獲得系列片段，克隆進(jìn)載體，由于片段之間存在重疊，可用一個(gè)片段作為探針，檢出其它片段，經(jīng)過測序后，可以把這些片段拼湊成一個(gè)連續(xù)的序列。 ? 基因表達(dá)系列分析技術(shù)（ serial analysis of gene expression, SAGE):以測序?yàn)榛A(chǔ)定量分析全基因組表達(dá)模式的技術(shù)，能直接讀出任何一種類型（細(xì)胞或組織）的基因表達(dá)信息。 ? 原位雜交（ in situ hybridization, ISH） : 用標(biāo)記的核酸探針在組織、細(xì)胞、間期核及染色體上對(duì)核酸進(jìn)行定位和相對(duì)定量的一種手段。分為 RNA原位雜交和染色體原位雜交 . ? 熒光原位雜交（ fluorescence in situ hybridization, FISH） :是一種細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，可以用來對(duì)核酸進(jìn)行檢測和定位。熒光素標(biāo)記的核酸探針通過原位雜交，只和具有高度相似性的核酸雜交，可用于染色體上基因的定位。 ? 定點(diǎn)突變（ sitedirected mutagenesis） :通過改變基因內(nèi)部特定位點(diǎn)的核苷酸序列（ 1~數(shù)個(gè)）來改變所編碼蛋白的氨基酸序列，通常用于研究某些氨基酸殘基對(duì)蛋白的結(jié)構(gòu)、催化活性及配體結(jié)合能力的影響，也可用于改變 DNA的調(diào)控序列、或引入新的酶切位點(diǎn)等。 ? RNA干擾（ RNA interference, RNAi ） :利用雙鏈小分子 RNA高效特異性降解細(xì)胞內(nèi)同源 mRNA，從而阻斷體內(nèi)靶基因表達(dá)，使細(xì)胞出現(xiàn)靶基因缺失的表型的技術(shù)。 ? DNA芯片（ DNA Chip）： 又稱為 DNA微列陣技術(shù)（ DNA microassay），將大量已知或未知序列的 DNA單鏈片段點(diǎn)在一張很小的玻璃片或尼龍膜上，通過物理吸附實(shí)現(xiàn)固定化，將芯片與待研究的 cDNA(熒光素標(biāo)記）雜交，經(jīng)過掃描和數(shù)據(jù)處理，可以觀察到成千上萬個(gè)基因在不同組織或同一組織不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)情況。 ? 蛋白質(zhì)組學(xué)（ Proteomics): 研究某一物種、個(gè)體、器官、組織或細(xì)胞在特定條件、特定時(shí)間所表達(dá)的全部蛋白質(zhì)圖譜，以研究特定基因表達(dá)情況的科學(xué)。 ? 基因組學(xué)（ Genomics): 研究某一物種全部基因的科學(xué)，對(duì)某一物種而言，基因組是固定的，而蛋白質(zhì)是不定的。 ? 噬菌體展示（ Phage display） :將目的基因插入噬菌體基因組，使之與噬菌體外殼蛋白基因融合，經(jīng)包裝后親染宿主細(xì)胞，產(chǎn)生子代噬菌體外殼上帶有目的基因編碼的蛋白。 ? 免疫共沉淀（ coimmunoprecipitation） 是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。是確定兩種蛋白質(zhì)在完整細(xì)胞內(nèi)生理性相互作用的有效方法。 ? Far Western blotting：一種基于 Western blotting的一種分子生物學(xué)方法。在 Western blotting中用抗體作為探針來檢測目標(biāo)蛋白，而在 Far Western blotting中用能夠與目標(biāo)蛋白結(jié)合的非抗體蛋白質(zhì)作為探針。因此， Western blotting用來檢測特定的蛋白而 Far Western blotting則用于檢測蛋白質(zhì)之間的相互作用 。 ? 組成型表達(dá) （ constitutive expression）：組成細(xì)胞的基因有些能夠連續(xù)指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成。 ? 適應(yīng)型表達(dá) （ adaptive expression)：有些基因只在特定環(huán)境條件或發(fā)育特定階段下才能指導(dǎo)蛋白質(zhì)的合成 ? 魔斑（ magic spot）核甘酸： 基因型為 rel+ 的大腸桿菌缺乏氨基酸大量合成鳥苷四磷酸（ ppGpp）和鳥苷五磷酸（ pppGpp）。 ? 弱化子（ attenuator） :位于結(jié)構(gòu)基因上游的一段 DNA，該DNA的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物可形成莖環(huán)結(jié)構(gòu)控制轉(zhuǎn)錄的進(jìn)行，使轉(zhuǎn)錄繼續(xù)或停止，這種調(diào)節(jié)受代謝物的調(diào)控。 ? 弱化作用（ attenuation） :由弱化子介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄提前終止的轉(zhuǎn)錄控制機(jī)制。 ? 基因家族（ gene family ） :真核細(xì)胞中許多功能相關(guān)的基因成套組合，組成一個(gè)基因家族。 ? 斷裂基因（ interrupted gene） :大多數(shù)的真核基因編碼氨基酸的序列為不編碼氨基酸的內(nèi)含子所隔開。 ? DNaseI超敏位點(diǎn)（ DNaseI hypersensitive site） : 活躍表達(dá)的基因所在染色體上存在一個(gè)或數(shù)個(gè)對(duì) DNaseI敏感的位點(diǎn)。 ? CpG島（ CpG island）： CpG中的 C通常發(fā)生甲基化修飾，且易脫氨基形成 T，所以細(xì)胞中 CG聯(lián)在一起出現(xiàn)的頻率要遠(yuǎn)低于其它兩個(gè)堿基出現(xiàn)在一起的頻率，細(xì)胞中的 CpG通常成串出現(xiàn)在 DNA中，稱為 CpG島。 ? 順式作用元件（ cisacting element）： 真核生物的啟動(dòng)子、增強(qiáng)子等是由若干 DNA序列構(gòu)成，它們常與特定的功能基因連鎖在一起，對(duì)基因轉(zhuǎn)錄具有重要調(diào)控作用，從而影響基因表達(dá)，這樣的 DNA序列稱為順式作用元件。 ? 反式作用因子（ Transacting factor）： 直接或間接結(jié)合在各類順式作用元件上，參與調(diào)控靶基因轉(zhuǎn)錄效率的蛋白質(zhì)。 ? 核心啟動(dòng)子元件（ core promoter） :25~30區(qū)的 TATA box ? 上游啟動(dòng)子元件（ UPE） :70~80的 CAAT box,80~110的 Gcbox, 通過與 TF作用，調(diào)節(jié)轉(zhuǎn)錄的起始頻率。 ? cAMP應(yīng)答元件（ cAMP response element, CRE） : cAMP激活 PKA， PKA又通過使許多轉(zhuǎn)錄因子磷酸化而激活其轉(zhuǎn)錄活性，這些轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合在調(diào)控基因 5’端的序列被稱為 cAMP應(yīng)答 ? 鈣調(diào)蛋白（ calmodulin） :生物體廣泛存在的一種鈣結(jié)合蛋白，該蛋白通過結(jié)合調(diào)節(jié)多種蛋白從而影響細(xì)胞功能。 ? 應(yīng)答元件（ response element） :與某個(gè)專一蛋白因子結(jié)合，從而控制基因特異表達(dá)的 DNA上游序列，是順式作用元件的一種。如熱激應(yīng)答元件（ heat shock response element, HSE），金屬應(yīng)答元件（ metal response element） ? 原癌基因（ protooncogene）： 基因組中某些基因在正常細(xì)胞中不表達(dá)，只有癌細(xì)胞中才表達(dá)，與細(xì)胞癌變密切相關(guān)，這類基因?yàn)樵┗颉? ? 原病毒（ provirus）： 某些病毒基因組為單鏈 RNA，感染動(dòng)物細(xì)胞后，利用其基因組中的 pol基因編碼的反轉(zhuǎn)錄酶合成與基因組互補(bǔ)的 DNA，再利用宿主的 DNA聚合酶合成第二鏈，成為雙鏈 DNA，并整合到宿主基因組中，這樣的 DNA為原病毒。 ? 基因領(lǐng)域（ gene territory） :同一條染色體上基因與基因之間的距離。 ? 基因領(lǐng)域效應(yīng)（ gene territorial effect） :染色體上同一方向的兩個(gè)基因小于一定距離時(shí)，會(huì)降低其轉(zhuǎn)錄活性。 ? 抑癌基因： 細(xì)胞染色體上存在的抑制細(xì)胞惡性增殖的一些基因。 ? HIV： 艾滋病病毒粒子是一種直徑約為 100nm的球狀病毒，包被著由兩層脂質(zhì)組成的脂膜，這種結(jié)合有許多糖蛋白分子（主要是 gp41和 gp120）的脂質(zhì)源于寄主細(xì)胞的外膜。蛋白質(zhì) p24和 p17組成其核心，內(nèi)有基因組 RNA鏈，鏈上附著有反轉(zhuǎn)錄酶。 ? HBV： 乙肝病毒完整粒子的直徑為 42nm，又稱為 Dane顆粒，由外膜和核殼組成，有很強(qiáng)的感染性。其外膜由病毒的表面抗原、多糖和脂質(zhì)構(gòu)成；核殼直徑 27nm，由病毒的核心抗原組成，并含有病毒的基因組 DNA、反轉(zhuǎn)錄酶和 DNA結(jié)合蛋白等。 ? AIV： 屬于正黏病毒科、流感病毒屬的 A型流感病毒。病毒顆粒直徑 80120nm，平均 100nm，呈球形，基因組為多個(gè) RNA. ? SARSCoV： 嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒， SARSCoV直徑 80160nm,有囊膜，表面有纖突（ Spike） ,排列呈皇冠狀。囊膜由脂質(zhì)雙分子層組成，上有纖突蛋白 S(E2)、血凝素脂酶HE(E3)、膜蛋白 M(E1)和小包膜蛋白 E。病毒核心是核衣殼蛋白 N以及基因組 +RNA。 ? 基因治療的 in vivo途徑 : 將外源基因 (治療基因 )裝配于特定的真核細(xì)胞表達(dá)載體上，直接導(dǎo)入人體內(nèi)。這種載體可以是病毒型或非病毒型，甚至是裸 DNA，有利于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。 ? 基因治療的 ex vivo途徑： 將含外源基因的載體在體外導(dǎo)入人體自身或異體（異種）被 “ 基因工程化的 ”細(xì)胞，經(jīng)體外細(xì)胞擴(kuò)增后輸回人體。 ? 等位基因排斥 （ allelic exclusion）：因?yàn)橐粭l染色體上的基因表達(dá)而抑制另一條染色體上相同基因表達(dá)的現(xiàn)象。 ? 同型排斥（ isotypic exclusion） ： B淋巴細(xì)胞的輕鏈表達(dá)時(shí)，只生成一種鏈（ κ鏈或是 λ鏈），不可能同時(shí)表達(dá) κ鏈和 λ鏈。 ? 遺傳圖 （ Geic Map） : 又稱連鎖圖（ Linkage Map），是指基因或 DNA標(biāo)志在染色體上的相對(duì)位置與遺傳距離，通常以基因或 DNA片段在染色體交換過程中的分離頻率厘摩（ cM）來表示。 cM值越大，兩者之間距離越遠(yuǎn)。 ? LINEs（ long interspersed elements） : 人類自主復(fù)制型轉(zhuǎn)座子，可能是人類基因組中最古老的重復(fù)序列，一般長 56 kb，含有 RNA聚合酶 II啟動(dòng)子序列和兩個(gè)可讀框 . ? SINEs（ short interspersed elements）是非自主轉(zhuǎn)座子，長約 100~400 bp，其 3’末端與 LINEs有同源性，因此能依靠 LINEs進(jìn)行轉(zhuǎn)座。 ? 物理圖 （ Physical Map）：以已知核苷酸序列的 DNA片段（序列標(biāo)簽位點(diǎn)， sequencetagged site， STS）為“ 路標(biāo) ” ，以堿基對(duì)（ bp， kb， mb）作為基本測量單位（圖距）的基因組圖。 ? 轉(zhuǎn)錄圖 （ Expression Profiling）：基因轉(zhuǎn)錄圖（ cDNA圖），或者基因的 cDNA片段圖，即表達(dá)序列標(biāo)簽圖（ EST， expressed sequence tag），以基因的外顯子序列或表達(dá)序列標(biāo)簽為標(biāo)記，精確地表明這些標(biāo)記在基因組或染色體上位置的物理圖。 ? 酵母人工染色體 （ yeast artificial chromosome,YAC）：利用酵母著絲粒載體所構(gòu)建的大片段 DNA克隆載體?？寺≥d體上含有著絲粒、端粒、可選擇標(biāo)志基因、自主復(fù)制等序列，可攜帶插入的大片段DNA(100～ 1000 kb)在酵母細(xì)胞中有效地復(fù)制，如同微小的人工染色體。是基因組研究的有用工具。 ? 細(xì)菌人工染色體 （ Bacterial artificial chromosome， BAC）：在大腸桿菌性因子 F質(zhì)粒的基礎(chǔ)上構(gòu)建的大片段 DNA克隆載體?？寺∧芰υ?125~150 kb左右，具有載體復(fù)制、拷貝數(shù)控制相關(guān)的序列及篩選標(biāo)記。 假基因 (pseudogene):具有與功能基因相似的序列，但由于有許多突變以致失去了原有的功能，所以假基因是沒有功能的基因，常用 ψ表示。 二、主要的知識(shí)點(diǎn) ? 組蛋白特性： a、進(jìn)化上的極端保守性 不同生物組蛋白組成及一級(jí)結(jié)構(gòu)十分相似，特別是 H3和 H4。如：牛、豬、鼠的 H4的氨基酸序列完全相同，而牛和豌豆的 H4只差 2個(gè) Aa。 b、無組織特異性 一個(gè)生物所有組織的組蛋白都相同。例外：魚類、鳥類和兩棲類動(dòng)物紅細(xì)胞染色體不含 H1，而含 H5，精細(xì)胞中的組蛋白是魚精蛋白。 c、肽鏈上 Aa分布的不對(duì)稱性 堿性氨基酸分布在 N端，而疏水氨基酸分布在 C端。作用： N端通過離子鍵與帶負(fù)電荷 DNA結(jié)合， C端通過疏水相互作用與其它蛋白結(jié)合。 d、組蛋白的修飾作用 H3,H4易發(fā)生甲基化、乙酰化、磷酸化等修飾，與基因表達(dá)的調(diào)控有關(guān)。 e、富含 Lys的 H5 具有種屬特異性， H5的磷酸化與染色體失活有關(guān)。 ? 染色質(zhì)中 DNA與組蛋白結(jié)合在一起的證據(jù) ① 染色質(zhì)中的 DNA的 Tm比游離的 DNA的 Tm高 . ② 在染色質(zhì)狀態(tài)下，其 DNA作為模板在 DNA聚合酶、 RNA聚合酶催化下的復(fù)制和轉(zhuǎn)錄活性大大低于游離 DNA。 ③ DNase I對(duì)染色質(zhì) DNA的降解速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于對(duì)游離 DNA的降解速度。 ? 真核生物基因組的結(jié)構(gòu)特點(diǎn) ①真核生物的基因組遠(yuǎn)大于原核生物的基因組 。 ②存在大量的重復(fù)序列 ③真核基因組中的 DNA大部分為非編碼序列，可達(dá) 90%以上。 ④真核基因的轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物多數(shù)是單順反子 mRNA。 ⑤真核生物的基因多數(shù)是斷裂基因，有內(nèi)含子。 ⑥真核基因中存在大量順式作用元件。 ⑦真核基因組存在大量 DNA多態(tài)性（ DNA polymorphism） ⑧ 真核基因組（染色體）具有端粒結(jié)構(gòu) ? DNA的類型 BDNA:相對(duì)濕度為 92%，右手螺旋。 ADNA:相對(duì)濕度小于 75%，右手螺旋，螺體寬而短，