【正文】 lotting中用能夠與目標(biāo)蛋白結(jié)合的非抗體蛋白質(zhì)作為探針。 ? 噬菌體展示（ Phage display） :將目的基因插入噬菌體基因組，使之與噬菌體外殼蛋白基因融合，經(jīng)包裝后親染宿主細(xì)胞，產(chǎn)生子代噬菌體外殼上帶有目的基因編碼的蛋白。 ? RNA干擾（ RNA interference, RNAi ） :利用雙鏈小分子 RNA高效特異性降解細(xì)胞內(nèi)同源 mRNA，從而阻斷體內(nèi)靶基因表達(dá)，使細(xì)胞出現(xiàn)靶基因缺失的表型的技術(shù)。 ? 原位雜交（ in situ hybridization, ISH） : 用標(biāo)記的核酸探針在組織、細(xì)胞、間期核及染色體上對(duì)核酸進(jìn)行定位和相對(duì)定量的一種手段。由于 DNA序列的改變導(dǎo)致了 DNA分子上限制性內(nèi)切酶的酶切位點(diǎn)發(fā)生改變，從而導(dǎo)致了相應(yīng)限制性酶切片段的長度和數(shù)量發(fā)生變化。分為5’RACE和 3’RACE。 ? 同義 cSNP (synonymous cSNP): SNP導(dǎo)致的編碼序列改變不影響其所翻譯蛋白的氨基酸序列 ,突變堿基與非突變堿基的含義相同 . ? 非同義 cSNP (nonsynonymous cSNP): SNP導(dǎo)致的編碼序列改變導(dǎo)致翻譯出蛋白質(zhì)的氨基酸序列發(fā)生改變 ,從而導(dǎo)致性狀的改變 . ? 單倍型（ haplotype） :位于某一等位基因內(nèi)部的多個(gè) SNP的總和。 ? Southwestern blotting: 蛋白質(zhì)經(jīng)過 PAGE分離并轉(zhuǎn)移到固相支持物上，用標(biāo)記的雙鏈 DNA檢出 DNA結(jié)合蛋白的方法。 ? 雜交分子（ Hybrid molecular） :不同來源的單鏈 DNA或 RNA分子退火形成的雙鏈分子。 ? 泛素（ ubiquitin)： 真核細(xì)胞中存在的由 76Aa組成的蛋白，高度保守，它通過結(jié)合在其它蛋白上，從而改變這些蛋白的功能，引導(dǎo)蛋白進(jìn)入蛋白酶體而降解。同工 tRNA結(jié)構(gòu)相似。 ? 密碼子兼并性（ codon degeneracy): 由一種以上的密碼子編碼同一 Aa的現(xiàn)象。 ? RNA編輯（ RNA editing): RNA特別是 mRNA的一種加工形式，它導(dǎo)致了 DNA所編碼的遺傳信息的改變，因?yàn)?RNA的序列經(jīng)過編輯發(fā)生改變。 ? RNA剪接（ RNA splicing): 從 RNA前體分子中去除被稱為內(nèi)含子（ intron)的非編碼區(qū)，連接被稱為外顯子（ exon)的編碼區(qū)，使之成為成熟 RNA分子的過程。 ? 下降突變（ down mutation)： 啟動(dòng)子內(nèi)的某個(gè)堿基突變導(dǎo)致其啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄效率降低的現(xiàn)象。 ? 終止子（ Terminator):位于基因 3’下游的一端 DNA，當(dāng)轉(zhuǎn)錄進(jìn)行到該區(qū)域時(shí)， RNA聚合酶與模板分離，RNA鏈釋放，轉(zhuǎn)錄終止。 P轉(zhuǎn)座子兩側(cè)有 31bp的倒置重復(fù)序列，插入靶位點(diǎn)還產(chǎn)生 8bp的正向重復(fù)序列。 ? 插入序列（ insertional sequence,IS)： 不含任何宿主基因的轉(zhuǎn)座子，當(dāng)其插入特定基因中造成該基因突變。這種復(fù)制兩鏈合成高度不對(duì)稱，一條鏈迅速指導(dǎo)互補(bǔ)鏈的合成，另一條鏈則游離出成單環(huán)（ D環(huán)）。 ? 端粒（ telomere):真核生物線性基因組末端的一種特殊結(jié)構(gòu)，是DNA和蛋白質(zhì)組成的復(fù)合體，其中的 DNA多為高度重復(fù)序列，能穩(wěn)定染色體 DNA，決定細(xì)胞壽命。廣泛分布于基因組中。但兩棲類動(dòng)物的 C 值比哺乳動(dòng)物的還大，并且兩棲類動(dòng)物的 C值相差也比較大，甚至相差 100倍，這種現(xiàn)象為 C值反?，F(xiàn)象。分子生物學(xué)復(fù)習(xí) 一、主要專業(yè)術(shù)語 ? 組蛋白： 真核細(xì)胞染色體結(jié)構(gòu)蛋白， 2M NaCl能使之與 DNA分開，包括： H1,H2A,H2B,H3,H4。 ? 衛(wèi)星 DNA（ satellite DNA): 真核生物染色體中的一些高度重復(fù)序列，通常位于染色體的著絲粒部位，也有一些存在于染色體臂上，當(dāng)該生物的總 DNA進(jìn)行電泳時(shí)，這些 DNA出現(xiàn)在主帶以外的衛(wèi)星區(qū)帶內(nèi)，衛(wèi)星 DNA不轉(zhuǎn)錄，是異染色質(zhì)成分，與染色體的穩(wěn)定性有關(guān)。 富含 AT堿基對(duì)。 ? DNA半保留復(fù)制（ Semiconservative replication): DNA在復(fù)制過程中，兩條鏈間的氫鍵斷裂，兩條鏈分開，每條鏈分別作為模板合成新鏈，產(chǎn)生互補(bǔ)的雙鏈，這樣新合成的兩個(gè) DNA與原 DNA分子的堿基序列完全相同，每個(gè)子代DNA中的一條鏈來自親代 DNA，另一條鏈?zhǔn)切潞铣傻摹? ? 半不連續(xù)復(fù)制（ DNA semidiscontinuous replication)： 從 DNA的復(fù)制過程來看，一條新鏈的合成是連續(xù)的，另外的一條鏈的合成是先合成一些短的岡崎片段，再連接成連續(xù)的新鏈，因此這種復(fù)制方式為半不連續(xù)復(fù)制。 ? 復(fù)合式轉(zhuǎn)座子（ posite transposon):帶有抗藥性基因或其它宿主基因的轉(zhuǎn)座子，其兩側(cè)帶有兩個(gè)相同或高度同源的 IS序列。 P轉(zhuǎn)座子含 4個(gè)外顯子和 3個(gè)內(nèi)含子。 ? 轉(zhuǎn)錄單元（ transcrition unit): 從啟動(dòng)子開始到終止子結(jié)束的一段 DNA序列。 ? 上升突變（ up mutation):啟動(dòng)子內(nèi)的某個(gè)堿基突變導(dǎo)致其啟動(dòng)轉(zhuǎn)錄效率提高的現(xiàn)象。 ? 核不均一 RNA（ hnRNA, heterogeneous nuclear RNA): 真核基因的原始轉(zhuǎn)錄產(chǎn)物，即 mRNA前體。 ? SD序列 （ ShineDalgarno sequence),或 核糖體結(jié)合位點(diǎn)（ ribosome binding site, RBS)：原核生物 mRNA起始密碼子前含有 712個(gè)核苷酸的保守區(qū)，與核糖體小亞基中16S rRNA的 3’端互補(bǔ)，在 mRNA核糖體結(jié)合過程中起作用 ? 核酶（ ribozyme): 一類具有催化功能的 RNA分子，通過催化 RNA鏈中的靶位點(diǎn)中磷酸二酯鍵的斷裂，特異性的剪接 RNA 分子。 ? 同義密碼子（ synonymous codon):對(duì)應(yīng)同一 Aa的不同密碼子。 ? 無義突變： 基因內(nèi)部一個(gè)核苷酸的突變，使編碼 Aa的密碼子突變成了終止密碼子，使蛋白質(zhì)合成提前終止，合成出無功能或無意義的多肽。 ? Klenow fragment: DNA聚合酶 I經(jīng)枯草芽孢桿菌蛋白酶 (subtilisin)切割產(chǎn)生的大片段 ,具有 DNA聚合酶和 3’→ 5’ 外切酶的活性 ,缺少 5’ → 3’ 外切酶的活性。 ? Southern blot(DNA 印跡）： 酶切的 DNA片段經(jīng)過瓊脂糖凝膠電泳分離，堿變性后轉(zhuǎn)移到固相支持物（ NC膜）上，用標(biāo)記的探針檢出目的片段所在位置的方法。 ? Northwestern blotting: 蛋白質(zhì)經(jīng)過 PAGE分離并轉(zhuǎn)移到固相支持物上，用標(biāo)記的 RNA檢出 RNA結(jié)合蛋白的方法。 ? 基因分型 ( genotyping): 利用數(shù)據(jù)庫中已有的 SNP進(jìn)行特定人群的序列和發(fā)生頻率的研究技術(shù) ,包括基因芯片技術(shù) ,Taqman技術(shù) ,分子信標(biāo) (molecular beacon)技術(shù)和焦磷酸測(cè)序技術(shù) (pyrosequencing)等 . ? 基因敲除（ gene knockout): 又稱基因打靶，通過外源 DNA與染色體 DNA間的同源重組，進(jìn)行精確的定點(diǎn)修飾和基因改造，使基因失活，從而確定基因與性狀的關(guān)系，具有專一性強(qiáng)，染色體DNA與外源 DNA共同穩(wěn)定遺傳等特點(diǎn)。 ? cDNA差示分析法（ representional difference analysis ,RDA):利用不同細(xì)胞來源的 cDNA雜交，通過改變接頭和 PCR技術(shù)擴(kuò)增目的 cDNA的片段。 ? RAPD(Random amplification polymorphic DNA, 隨機(jī)擴(kuò)增多態(tài)性 DNA): 利用隨機(jī)引物，通過 PCR從基因組中擴(kuò)增不同長度的DNA片段的技術(shù)。分為 RNA原位雜交和染色體原位雜交 . ? 熒光原位雜交（ fluorescence in situ hybridization, FISH） :是一種細(xì)胞遺傳學(xué)技術(shù)，可以用來對(duì)核酸進(jìn)行檢測(cè)和定位。 ? DNA芯片（ DNA Chip）： 又稱為 DNA微列陣技術(shù)（ DNA microassay），將大量已知或未知序列的 DNA單鏈片段點(diǎn)在一張很小的玻璃片或尼龍膜上，通過物理吸附實(shí)現(xiàn)固定化，將芯片與待研究的 cDNA(熒光素標(biāo)記）雜交，經(jīng)過掃描和數(shù)據(jù)處理，可以觀察到成千上萬個(gè)基因在不同組織或同一組織不同發(fā)育時(shí)期的表達(dá)情況。 ? 免疫共沉淀（ coimmunoprecipitation） 是以抗體和抗原之間的專一性作用為基礎(chǔ)的用于研究蛋白質(zhì)相互作用的經(jīng)典方法。因此， Western blotting用來檢測(cè)特定的蛋白而 Far Western blotting則用于檢測(cè)蛋白質(zhì)之間的相互作用 。 ? 弱化作用（ attenuation） :由弱化子介導(dǎo)的轉(zhuǎn)錄提前終止的轉(zhuǎn)錄控制機(jī)制。 ? CpG島（ CpG island）： CpG中的 C通常發(fā)生甲基化修飾，且易脫氨基形成 T，所以細(xì)胞中 CG聯(lián)在一起出現(xiàn)的頻率要遠(yuǎn)低于其它兩個(gè)堿基出現(xiàn)在一起的頻率，細(xì)胞中的 CpG通常成串出現(xiàn)在 DNA中，稱為 CpG島。 ? cAMP應(yīng)答元件（ cAMP response element, CRE） : cAMP激活 PKA， PKA又通過使許多轉(zhuǎn)錄因子磷酸化而激活其轉(zhuǎn)錄活性，這些轉(zhuǎn)錄因子結(jié)合在調(diào)控基因 5’端的序列被稱為 cAMP應(yīng)答 ? 鈣調(diào)蛋白（ calmodulin） :生物體廣泛存在的一種鈣結(jié)合蛋白，該蛋白通過結(jié)合調(diào)節(jié)多種蛋白從而影響細(xì)胞功能。 ? 基因領(lǐng)域（ gene territory） :同一條染色體上基因與基因之間的距離。蛋白質(zhì) p24和 p17組成其核心，內(nèi)有基因組 RNA鏈，鏈上附著有反轉(zhuǎn)錄酶。病毒顆粒直徑 80120nm，平均 100nm，呈球形，基因組為多個(gè) RNA. ? SARSCoV： 嚴(yán)重急性呼吸系統(tǒng)綜合征冠狀病毒， SARSCoV直徑 80160nm,有囊膜，表面有纖突（ Spike） ,排列呈皇冠狀。這種載體可以是病毒型或非病毒型，甚至是裸 DNA，有利于大規(guī)模工業(yè)化生產(chǎn)。 ? 遺傳圖 （ Geic Map） : 又稱連鎖圖（ Linkage Map），是指基因或 DNA標(biāo)志在染色體上的相對(duì)位置與遺傳距離，通常以基因或 DNA片段在染色體交換過程中的分離頻率厘摩（ cM）來表示。 ? 轉(zhuǎn)錄圖 （ Expression Profiling）：基因轉(zhuǎn)錄圖（ cDNA圖），或者基因的 cDNA片段圖，即表達(dá)序列標(biāo)簽圖（ EST， expressed sequence tag），以基因的外顯子序列或表達(dá)序列標(biāo)簽為標(biāo)記，精確地表明這些標(biāo)記在基因組或染色體上位置的物理圖。 ? 細(xì)菌人工染色體 （ Bacterial artificial chromosome， BAC）：在大腸桿菌性因子 F質(zhì)粒的基礎(chǔ)上構(gòu)建的大片段 DNA克隆載體。如：牛、豬、鼠的 H4的氨基酸序列完全相同，而牛和豌豆的 H4只差 2個(gè) Aa。作用： N端通過離子鍵與帶負(fù)電荷 DNA結(jié)合， C端通過疏水相互作用與其它蛋白結(jié)合。 ③ DNase I對(duì)染色質(zhì) DNA的降解速度遠(yuǎn)遠(yuǎn)低于對(duì)游離 DNA的降解速度。 ⑤真核生物的基因多數(shù)是斷裂基因，有內(nèi)含子。 ZDNA： Rich, CGCGCG寡聚體，左手螺旋 環(huán)狀 DNA：線粒體 DNA,葉綠體 DNA，病毒DNA，質(zhì)粒 DNA等。 ? 此外，還發(fā)現(xiàn)了 DNA聚合酶 IV和 DNA聚合酶 V，參與DNA的修復(fù)。 （ 4）真核生物 DNA復(fù)制速度慢，不到 1/20。 ? IS的特征： a、較小，約 1kb b、末端具有倒置重復(fù)序列 c、轉(zhuǎn)座時(shí)復(fù)制靶位點(diǎn)的一段 DNA(415bp)，插入靶位點(diǎn)形成兩端的正向重復(fù)序列。 ? 真核生物啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)特點(diǎn) 25~30區(qū)， TATAAA， TATA box(Hogness box) 70~80區(qū)， CCAAT, CAAT box 80~110區(qū)， 富含 GC， GC box ? 原核生物與真核生物啟動(dòng)子結(jié)構(gòu)的差異 原核生物的啟動(dòng)子小，結(jié)構(gòu)簡單，除 10區(qū)的 TATA box,35區(qū)的 TTGACA， 30~70區(qū)為正調(diào)控因子結(jié)合序列， +1~20區(qū)為負(fù)調(diào)控因子結(jié)合序列。 ? 原核生物與真核生物 mRNA的特征比較 原核生物邊轉(zhuǎn)錄邊翻譯，真核生物 mRNA的轉(zhuǎn)錄和翻譯在時(shí)空上是分開。 原核生物 mRNA起始密碼子前含有 712個(gè)核苷酸的保守區(qū)，與核糖體小亞基中 16S rRNA的 3’端互補(bǔ)，在 mRNA核糖體結(jié)合過程中起作用，稱為 SD序列 （ ShineDalgarno sequence),或 核糖體結(jié)合位點(diǎn) （ ribosome binding site, RBS), 真核 mRNA無該結(jié)構(gòu)。反密碼子第 1位是 G或 U,可識(shí)別兩種密碼子，即 G/C,U。 肽鍵的生成 在肽基轉(zhuǎn)移酶（ peptidyl transferase)作用下，位于 A部位的 AatRNA與位于 P部位的 fMettRN