電泳技術(shù)及其在分子生物學(xué)中的應(yīng)用-wenkub
2023-01-31 19:44:38 本頁面
【正文】 磷酸（ TPE）等，濃度約為 50mmol/L(~)。 瓊脂糖凝膠電泳 （ agrose gel electrophoresis ） 聚丙烯酰胺凝膠電泳 （ polyacrylamide gel electrophoresis， PAGE） 凝膠電泳 用于分離、鑒定和純化 DNA片段 重點內(nèi)容 影響 DNA在瓊脂糖凝膠中的遷移速率的因素有哪些？ Western blotting 的基本實驗步驟 ,及每一步的操作意義 . 瓊脂糖凝膠電泳 瓊脂糖（ agarose）是由瓊脂分離制備的鏈狀多糖。 ? 凈電荷： 生物大分子如蛋白質(zhì)、核酸、多糖等常以顆粒形式分散在溶液中，它們的 凈電荷 取決于介質(zhì)的 H+濃度與其他大分子的相互作用。 ? 在 電場 中，帶電顆粒向陰極或陽極遷移，遷移的方向取決于它們帶電的符號。其結(jié)構(gòu)單元是 D半乳糖和 L半乳糖。 含不同量瓊脂糖的凝膠的分離范圍 凝膠中的瓊脂糖含量 [%（ w/v） ] 線狀 DNA分子的有效分離范圍（ kb） 560 120 瓊脂糖濃度的選擇 ：根據(jù)被分離 線狀 DNA片斷的大小 樣品配制與加樣 DNA樣品用適量 TrisEDTA緩沖液溶解，緩沖液內(nèi)含有 %溴酚藍(lán)或其他指示染料， 含有 10%15%蔗糖或 5%~ 10%甘油，以增加其比重，使樣品集中。 cm ：電場正負(fù)極間的距離。 將已知分子量的標(biāo)準(zhǔn) DNA的遷移率對分子量對數(shù)作圖，可獲得一條標(biāo)準(zhǔn)曲線，未知 DNA片段在相同條件下進(jìn)行電泳，根據(jù)它的電泳遷移率即可在標(biāo)準(zhǔn)曲線上求得其分子量。 ? 凝膠和電泳緩沖液中的溴化乙錠 。一亞甲雙丙烯酰胺參與下，聚丙烯胺鏈與鏈之間交叉聯(lián)接而形成凝膠 . 與瓊脂糖凝膠電泳的比較 , PAGE的特點 ?分辨率很強，長度上相差 1bp的 DNA即可分開； ?從聚丙烯酰胺凝膠中回收的 DNA純度很高，可適用于要求最高的實驗（如胚胎注射）； ?裝載更多的 DNA量； ?最適合分離小片段 DNA(5500bp),可以分離 蛋白質(zhì) 。 限制性片段多態(tài)性 (RFLP) 點多態(tài)性實驗方法
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