電泳分離技術(shù)ppt課件-在線瀏覽
2025-06-22 03:00本頁(yè)面
【正文】 。 電泳技術(shù)圍繞制膠、電泳、染色三個(gè)技術(shù)環(huán)節(jié)，不斷改進(jìn)，以實(shí)現(xiàn)下列目標(biāo)： 提高分辨率及靈敏度。 擴(kuò)大應(yīng)用范圍。 ①區(qū)帶電泳 ②自由界面電泳 ③ 等速電泳： 需使用專用電泳儀，當(dāng)電泳達(dá)到平衡后，各電泳區(qū)帶相隨，分成清晰的界面，并以等速向前運(yùn)動(dòng)。 ，分為紙電泳、醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、 SDS—— 聚丙烯酰胺凝膠電泳等。 、制備電泳、定量免疫電泳、連續(xù)制備電泳等。 ②高壓電泳： 1000v~5000v，電泳時(shí)間短，有時(shí)只需幾分鐘，多用于氨基酸、多肽、核苷酸和糖類等小分子物質(zhì)的分離 影響電泳速度的因素 顆粒性質(zhì)：直徑、形狀、靜電荷。 電滲： 液體對(duì)固體支持物的相對(duì)移動(dòng) 。反之亦然。秒 or分 ) U: 電壓 常壓 (100— 500v) 高壓 (500— 10000v)僅需幾分鐘 l: 支持場(chǎng)的長(zhǎng)度 (有效長(zhǎng)度 ) 遷移率 (mobility) ： 帶電顆粒在單位電場(chǎng)強(qiáng)度下的泳動(dòng)速度 . 凝膠電泳 主要介質(zhì)為瓊脂糖和聚丙烯酰胺凝膠 瓊脂糖 —— 篩分作用小，適于大分子物質(zhì) 聚丙烯酰胺 —— 分離效果好，分辨率高，適于小分子物質(zhì) 聚丙烯酰胺 聚丙烯酰胺凝膠電泳 (PAGE)是一種利用人工合成的凝膠作為支持介質(zhì)的區(qū)帶電泳。 PAGE具有電泳和分子篩的雙重作用。 原理 以孔徑大小不同的聚丙烯酰胺凝膠為支持物，采用電泳基質(zhì)的不連續(xù)體系（即凝膠層、緩沖液離子成分、 PH、電位梯度均不連續(xù)），使樣品在不連續(xù)的兩層凝膠之間積聚濃縮成很窄的樣品區(qū)帶（厚度為 ），然后再進(jìn)行分離，從而提高了分辨率。 T—— 單體的總百分濃度 C—— 交聯(lián)百分濃度 a—— 丙烯酰胺的克數(shù) b—— 亞甲基雙丙烯酰胺克數(shù) m—— 體積 聚丙烯酰胺凝膠的有效孔徑取決于總濃度，隨濃度的增加而降低。 化學(xué)聚合： 制小孔膠。 特別注意 丙烯酰胺和亞甲基雙丙烯酰胺對(duì)中樞神經(jīng)系統(tǒng)有損傷作用 . 丙烯酰胺和亞甲基雙丙烯酰胺要避光保存 . 混合的溶液保存不宜超過(guò)一個(gè)月 . 瓊脂糖凝膠電泳 （ 一 ） 優(yōu)點(diǎn) ， 幾乎消除了瓊脂的電滲 ， 故無(wú)拖尾現(xiàn)象 。 ， 可直接或干燥成薄膜后進(jìn)行染色 。 ， 不易保存 ， 臨用前配制 。 PAGE相比，分子篩作用小，區(qū)帶少。一般選用較低的離子濃度。 濃縮膠 —— 分離膠 均一膠 —— 梯度膠 染色方法常用考馬斯亮藍(lán)、溴酚藍(lán)等。 考馬斯亮藍(lán) G250：靈敏度不如 R250，但不溶于酸性溶液。銀染蛋
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