電泳分離技術ppt課件-資料下載頁
2025-05-05 03:00本頁面
【正文】 定 pH溶液中 ， 帶正電的蛋白分子將向負極移動而帶負電的蛋白分子將向正極移動 ， 在某一 pH時 ， 蛋白分子在電場中不再移動 ， 此時的 pH值即為該蛋白質的等電點 。 等電聚焦 (IEF） 電泳就是在凝膠中加入兩性電解質從而構成從正極到負極 pH逐漸增加的 pH梯度 ， 處在其中的蛋白分子在電場的作用下運動 ， 最后各自停留在其等電點的位置上 ， 測出蛋白分子聚焦位置的 pH值 ， 便可以得到 它的等電點 。 雙向電泳 1975年 ， O’Farrell 首先運用雙向電泳技術將大腸桿菌總蛋白分離出 1100多個蛋白點 。 后來此技術一直用于原核生物和真核生物總蛋白的分離 。 目前 ， 隨著蛋白組工程的發(fā)展 ， 雙向電泳技術越來越廣泛的用于發(fā)現(xiàn)未知蛋白 。 雙向電泳由第一向等電聚焦 (IEF)電泳和第二向 SDS聚丙烯酰胺凝膠電泳 (SDSPAGE)組成 ， 第一向使等電點不同的蛋白得到分離 ， 第二向使分子量不同的蛋白得到分離 ， 兩向結合便得到高分辨率的蛋白圖譜 。 雙向電泳具有一些明顯的優(yōu)點 可在不同電泳技術的基礎上構建雙向電泳 雙向電泳的應用 低豐度蛋白質的檢測 蛋白質檢測和分析 蛋白質組學和代謝組學 毛細管電泳 毛細管電泳（ capillary elecrophoresis, CE）是 以高壓電場為驅動力，以毛細管為分離通道， 依據(jù)樣品中各組分之間淌度和分配行為上的差異而實現(xiàn)分離分析的液相分離方法。 高效毛細管電泳在技術上采取了兩項重要改進： ① 采用了 ； ② 采用了高達數(shù)千伏的電壓。 電極槽和進樣系統(tǒng) 清洗系統(tǒng) 毛細管 檢測器 鉑電極 電極槽 恒溫系統(tǒng) 記錄和數(shù)據(jù)處理 毛細管電泳的特點 柱效高，可達 105～ 106/m 分離速度快，幾十秒～幾十分鐘 溶劑和試樣消耗極少 沒有高壓泵，儀器成本比 HPLC更低 選擇性強 檢測器 紫外 /可見光檢測器 安培檢測器 MS 應用 測序 基因治療與基因診斷 刑事偵查 單細胞分析 手性分離 小分子和離子分離 親和毛細管電泳 指在電泳過程中具有生物專一性親和力的兩種分子間，發(fā)生了特異性相互作用，形成受體 配體復合物，通過對比親和作用發(fā)生前后的電泳圖譜，可獲得有關受體 配體親和力大小、結構變化、作用產物等方面的信息。 毛細管電泳色譜 在毛細管中填充或在管壁涂布、鍵合色譜固定相，依靠電滲流推動流動相，溶質由于在色譜固定相和流動相間吸附與分配平衡常數(shù)的不同和電泳速率的不同而達到分離目的。 制備電泳綜述 制備等點聚焦 自由流動電泳 梯度流系統(tǒng) 多通道流動電泳
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