生物分離工程第八章電泳技術(shù)-資料下載頁(yè)
2025-01-16 11:54本頁(yè)面
【正文】 載體兩性電解質(zhì) pH梯度等電聚焦原理 ?載體兩性電解質(zhì) pH梯度等電聚焦是在支持介質(zhì)中加入 載體兩性電解質(zhì) ，通以直流電后在兩極之間 形成穩(wěn)定、連續(xù)和線性的 pH梯度 ，當(dāng)帶電的蛋白質(zhì)分子進(jìn)入該體系時(shí)，便會(huì)產(chǎn)生移動(dòng)，并 聚集于相當(dāng)于其等電點(diǎn)的位置 。 等電聚焦分離示意圖 常規(guī) PAGE和等電聚焦電泳的區(qū)別 載體兩性電解質(zhì)和 pH梯度的形成 ?等電聚焦技術(shù)的關(guān)鍵在于 pH梯度的建立 ?載體兩性電解質(zhì)的概念： 作為載體兩性電解質(zhì)應(yīng)該具有以下特點(diǎn)： – 應(yīng)該是兩性的，使它們?cè)诜蛛x柱中也能達(dá)到一個(gè)平衡位置； – 應(yīng)該可以作為“載體”，兩性電解質(zhì)不能用于等電聚焦，只有載體兩性電解質(zhì)，即具有好的導(dǎo)電性和好的緩沖能力的化合物才能用于等電聚焦。 用于等電聚焦的主要載體兩性電解質(zhì) ? Ampholine(瑞典 LKB公司 ) – 由許多脂肪族的多氨基多羧基的異構(gòu)體和同系物組成，它們具有連續(xù)改變的氨基與羧基比 ? Servalyte (德國(guó) Serva 公司 ) – 產(chǎn)品 Biolyte ? Pharmalyte (瑞典 Pharmacia 公司 ) – 產(chǎn)品分為九種 pH范圍 pH梯度的形成 ?在沒有電場(chǎng)時(shí)，載體兩性電解質(zhì)的 pH值大約是該溶液 pH范圍的平均值 ，所有載體兩性電解質(zhì)分子都荷電。 ?當(dāng)引入電場(chǎng)時(shí)， 載體兩性電解質(zhì)分子將向陰極或陽(yáng)極遷移，帶有最低等電點(diǎn)的分子（荷最多負(fù)電）將最快地向陽(yáng)極移動(dòng)；當(dāng)它達(dá)到凈電荷為 0的位置時(shí)才停止，這個(gè)位置靠近陽(yáng)極，由于它具有高的緩沖能力，使環(huán)境溶液的 pH等于分子本身的 pI。 ?其次， 一些低 pI的載體兩性電解質(zhì)（荷其次多的負(fù)電）也向陽(yáng)極移動(dòng)，直到它的凈電荷減少到 0才停止。同樣的，其周圍環(huán)境溶液 pH值也等于它本身的 pI。依次類推，所有的載體兩性電解質(zhì)分子用增加 pI級(jí)數(shù)的方法將分別在陽(yáng)極、陰極之間到達(dá)它們自己的位置，從而給出一個(gè) pH梯度。 載體兩性電解質(zhì)在電場(chǎng)中 形成 pH梯度的模式圖 水平等電聚焦電泳 ?制膠：溶液配制（丙烯酰胺、 N， N’甲叉雙丙烯酰胺、載體兩性電解質(zhì)等），灌膠； ?電泳：加樣可在凝膠上的任何位置，濃度一般為 ~2mg/ml； ?固定： ?染色： ?脫色： 等電聚焦的主要應(yīng)用 ?同工酶分離、分析 ? pI 測(cè)定 實(shí)際應(yīng)用當(dāng)中，等電聚焦的操作過程要復(fù)雜得多，具體內(nèi)容可參考 《 蛋白質(zhì)電泳實(shí)驗(yàn)技術(shù) 》，作者：郭堯君，科學(xué)出版社。 雙相電泳 ?第一相 等電聚焦 ?第二相 SDS－ PAGE 目的：為了獲得更詳細(xì)的組分信息 目前已經(jīng)廣泛應(yīng)用于蛋白質(zhì)組研究中 本章作業(yè) ? 電泳的基本原理 ? 電泳技術(shù)的分類 ? 常用的凝膠電泳技術(shù)有哪些？ ? 聚丙稀酰胺凝膠電泳與 SDSPAGE的異同 ? 瓊脂糖電泳的特點(diǎn)及其應(yīng)用 ? 等電聚焦電泳的基本原理 ? 雙相電泳的概念及其特點(diǎn)
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