電泳分離技術(shù)ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-01 03:00 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 (引發(fā)劑 ) N,N,N’ ,N’ 四甲基乙二胺 TEMED (加速劑 ) 被激活的單體和未被激活的單體開始了多聚鏈的延伸，正在延伸的多聚鏈也可以隨機地接上雙丙稀酰胺，使多聚鏈交叉互連成為網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)，最終多聚鏈聚合成凝膠狀。 特別注意 丙烯酰胺和亞甲基雙丙烯酰胺對中樞神經(jīng)系統(tǒng)有損傷作用 . 丙烯酰胺和亞甲基雙丙烯酰胺要避光保存 . 混合的溶液保存不宜超過一個月 . 瓊脂糖凝膠電泳 （ 一 ） 優(yōu)點 ， 幾乎消除了瓊脂的電滲 ， 故無拖尾現(xiàn)象 。 ， 孔徑較大 ， 可用來分離酶的復(fù)合物 、 核酸 、病毒 等大分子物質(zhì) 。 ， 可直接或干燥成薄膜后進行染色 。 ， 可直接利用紫外光吸收法作定量測定 （ 二 ） 缺點 ， 濃度不能太低 。 ， 不易保存 ， 臨用前配制 。 ， 電泳后必須立即固定染色 。 PAGE相比，分子篩作用小，區(qū)帶少。 主要性能指標 電內(nèi)滲 膠凝溫度 熔化溫度 凝膠強度 脫水收縮作用 瓊脂糖的選擇 凝膠電泳的應(yīng)用 —— 常規(guī)聚丙烯酰胺電泳 分子篩效應(yīng)提高了分辨率 各種大分子的分離 研究生物大分子的特性 可保持分離物的生物活性 緩沖系統(tǒng)的選擇 pH值由于影響蛋白質(zhì)的解離，在電泳過程中具有重要作用 離子強度既要起到緩沖作用，同時還需產(chǎn)熱少，對電流相對貢獻小。一般選用較低的離子濃度。 凝膠濃度的選擇在于選擇合適的孔徑。 濃縮膠 —— 分離膠 均一膠 —— 梯度膠 染色方法常用考馬斯亮藍、溴酚藍等。 理想顯色劑的 7S 安全 （ safety） 靈敏 （ sensitivity） 簡單 （ simplicity） 特異性 （ specificity） 快速 （ speed） 穩(wěn)定 （ stability） 兼容性 （ synergy） 考馬斯亮藍 R250：靈敏度是氨基黑 10B的 5倍，但不適用與酸溶蛋白、醇溶蛋白。 考馬斯亮藍 G250：靈敏度不如 R250，但不溶于酸性溶液。 考染靈敏度為 30~100ng，線性范圍是 20倍 . 銀染法 機制：將蛋白質(zhì)帶上的硝酸銀（銀離子）還原成金屬銀，使銀顆粒沉積在蛋白帶上。銀染蛋白的吸光度與他們的濃度成線性關(guān)系。 蛋白質(zhì)的染色程度與蛋白質(zhì)上的特殊基團有關(guān)， 堿性和含硫氨基酸 的存在對染色有貢獻。 銀染應(yīng)先固定，固定的作用有兩個：第一是把蛋白質(zhì)固定在凝膠中阻止擴散。第二為了除去干擾染色的物質(zhì)，如去污劑、還原試劑和緩沖液中的成分（甘氨酸）。固定劑有戊二醛、乙醇、甲醇醋酸、三氯醋酸。 染色分為雙胺銀
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