電泳分離技術(shù)ppt課件(已修改)
2025-05-17 03:00 本頁面
【正文】 第十一章 電泳分離技術(shù) 廣泛應(yīng)用于各個科學(xué)領(lǐng)域的新型 分離技術(shù) 概述 在電解質(zhì)溶液中，位于電場中的帶電離子在電場力的作用下，以不同的速度向其所帶電荷相反的電極方向遷移的現(xiàn)象，稱之為電泳。由于不同離子所帶電荷及性質(zhì)的不同，遷移速率不同，可實(shí)現(xiàn)分離。 1809年俄國物理學(xué)家 Peiice首次發(fā)現(xiàn)電泳現(xiàn)象，他在濕粘土中插上帶玻璃管的正負(fù)兩個電極，加電壓后發(fā)現(xiàn)正極玻璃管中原有的水層變渾濁，即帶負(fù)電荷的粘土顆粒向正極移動，這就是電泳現(xiàn)象。 1909年 Michaelis首次將膠體離子在電場中的移動稱為電泳。他用不同 pH的溶液在 U形管中測定了轉(zhuǎn)化酶和過氧化氫酶的電泳移動和等電點(diǎn)。 1937年， Tiselius(瑞典 )將蛋白質(zhì)混合液放在兩段緩沖溶液之間，兩端施以電壓進(jìn)行自由溶液電泳，第一次將人血清提取的蛋白質(zhì)混合液分離出白蛋白和 α、 β、 γ球蛋白。 第一次的自由溶液電泳；第一臺電泳儀； 1948年，獲諾貝爾化學(xué)獎； 由于早期的電泳儀價(jià)格昂貴，分辨率低，易產(chǎn)生對流，因而逐漸發(fā)展起了區(qū)帶電泳。 自由界面電泳：又稱移動界面電泳，是指在沒有支持介質(zhì)的溶液中進(jìn)行的電泳。其裝置復(fù)雜，價(jià)格昂貴，費(fèi)時(shí)費(fèi)力，不便于推廣應(yīng)用。 區(qū)帶電泳是指在電泳遷移中以一個緩沖溶液飽和了的固相介質(zhì)作為支持介質(zhì)，減少外界干擾的電泳技術(shù)。 凝膠電泳和等電聚焦電泳由于其明顯的優(yōu)越性，得到了越來越廣泛的應(yīng)用。 電泳分析的特點(diǎn) 各種電泳技術(shù)具有如下特點(diǎn)： 凡是帶電物質(zhì)均可應(yīng)用某一電泳技術(shù)進(jìn)行分離，并可以進(jìn)行定性或定量分析； 樣品量極少； 設(shè)備簡單，可在常溫下進(jìn)行； 操作簡單省時(shí)； 分辨率高。已被廣泛應(yīng)用于基礎(chǔ)理論研究，臨床診斷及工業(yè)制造等方面。 電泳技術(shù)圍繞制膠、電泳、染色三個技術(shù)環(huán)節(jié)，不斷改進(jìn)，以實(shí)現(xiàn)下列目標(biāo)： 提高分辨率及靈敏度。 簡化操作，縮短電泳時(shí)間。 擴(kuò)大應(yīng)用范圍。 電泳的分類 ，分為區(qū)帶電泳、移動界面電泳、等速電泳、等電聚焦電泳等。 ①區(qū)帶電泳 ②自由界面電泳 ③ 等速電泳： 需使用專用電泳儀，當(dāng)電泳達(dá)到平衡后，各電泳區(qū)帶相隨，分成清晰的界面，并以等速向前運(yùn)動。 ④等電聚焦電泳： 由兩性電解質(zhì)在電場中自動形成 pH梯度，當(dāng)被分離的生物大分子移動到各自等電點(diǎn)的 pH出聚集成很窄的區(qū)帶。 ，分為紙電泳、醋酸纖維薄膜電泳、瓊脂凝膠電泳、聚丙烯酰胺凝膠電泳、 SDS—— 聚丙烯酰胺凝膠電泳等。 ，分為薄層電泳、板電泳、柱電泳等。 、制備電泳、定量免疫電泳、連續(xù)制備電泳等。 ： ①低壓電泳： 100v~50
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