電泳分離技術(shù)ppt課件-文庫吧資料
2025-05-11 03:00本頁面
【正文】 測定 。顯色約 10分鐘，蛋白帶出現(xiàn)。 雙胺銀染過程： 1. 膠在 50%甲醇中浸泡至少 1小時 . 2. 配制溶液 A 4毫升無離子水。 染色分為雙胺銀染和非雙胺銀染。第二為了除去干擾染色的物質(zhì)，如去污劑、還原試劑和緩沖液中的成分（甘氨酸）。 蛋白質(zhì)的染色程度與蛋白質(zhì)上的特殊基團有關(guān)， 堿性和含硫氨基酸 的存在對染色有貢獻。 考染靈敏度為 30~100ng，線性范圍是 20倍 . 銀染法 機制：將蛋白質(zhì)帶上的硝酸銀（銀離子）還原成金屬銀，使銀顆粒沉積在蛋白帶上。 理想顯色劑的 7S 安全 （ safety） 靈敏 （ sensitivity） 簡單 （ simplicity） 特異性 （ specificity） 快速 （ speed） 穩(wěn)定 （ stability） 兼容性 （ synergy） 考馬斯亮藍 R250：靈敏度是氨基黑 10B的 5倍，但不適用與酸溶蛋白、醇溶蛋白。 凝膠濃度的選擇在于選擇合適的孔徑。 主要性能指標 電內(nèi)滲 膠凝溫度 熔化溫度 凝膠強度 脫水收縮作用 瓊脂糖的選擇 凝膠電泳的應(yīng)用 —— 常規(guī)聚丙烯酰胺電泳 分子篩效應(yīng)提高了分辨率 各種大分子的分離 研究生物大分子的特性 可保持分離物的生物活性 緩沖系統(tǒng)的選擇 pH值由于影響蛋白質(zhì)的解離，在電泳過程中具有重要作用 離子強度既要起到緩沖作用，同時還需產(chǎn)熱少，對電流相對貢獻小。 ， 電泳后必須立即固定染色 。 ， 可直接利用紫外光吸收法作定量測定 （ 二 ） 缺點 ， 濃度不能太低 。 ， 孔徑較大 ， 可用來分離酶的復(fù)合物 、 核酸 、病毒 等大分子物質(zhì) 。 過硫酸銨 APS (引發(fā)劑 ) N,N,N’ ,N’ 四甲基乙二胺 TEMED (加速劑 ) 被激活的單體和未被激活的單體開始了多聚鏈的延伸，正在延伸的多聚鏈也可以隨機地接上雙丙稀酰胺，使多聚鏈交叉互連成為網(wǎng)狀立體結(jié)構(gòu)，最終多聚鏈聚合成凝膠狀。 有效孔徑?jīng)Q定蛋白質(zhì)的分離 聚合方式 光聚合 ： 核黃素為催化劑 (陽光 ,日光 )，制大孔膠。 聚丙烯酰胺凝膠電泳的特點 設(shè)備簡單 樣品量?。?1100微克） 時間短（ 3060分鐘） 操作方便 分離范圍廣（多肽，蛋白，多糖等） 可提高靈敏度改為超微量測定（ 1012~109） 可用于蛋白質(zhì)分子量測定 凝膠特性 機械性能、彈性、孔徑大小等。 PAGE是目前最常用的電泳方法。聚丙烯酰胺凝膠是由
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