離心分離技術ppt課件(編輯修改稿)
2025-05-28 22:13 本頁面
【文章內容簡介】 包含體產物分離工藝（牛生長激素分離提?。? 超 濾 器濾 液透 析 器緩 沖 液凝 膠 過 濾 柱超 濾 器濾 液水E D T A細 胞 壁 溶 解 酶 緩 沖 液攪 拌 混 合 罐水 高 壓 勻 漿 器鹽 酸 胍上 相攪 拌 混 合 罐緩 沖 液離 心 機下 相發(fā) 酵 罐粗 包 含 體攪 拌 混 合 罐空 氣167。 離心機在生物工業(yè)中的應用 （ P67） 167。 超離心法 超離心法 ： 根據物質的 沉降系數 、 質量 和 形狀 不同，應用強大的離心力 ，將混合物中各組分分離、濃縮、提純的方法。 一、 超離心技術的原理 在某種介質中，使一種球形粒子從液體的彎月面沉降到離心管某部 (如底部 )所需的時間： 當粒子 直徑和密度 不同 , 移動同樣距離所需的時間不同 , 在同樣的沉降時間 , 其沉降位置也不同 . 式中 t為沉降時間， μ為懸浮介質的粘度， d為粒子直徑， ρs為粒子密度， ρ為介質密度； r1為旋轉軸中心到液體彎月面的距離， r2為從旋轉軸中心到離心管底部的距離。 利用它可以 從組織勻漿中分離細胞器 ，其主要細胞成分的沉降順序， 一般先是整細胞和細胞碎片，然后是核、葉綠體、線粒體、溶酶體、微粒體和核蛋白體 。 二、超離心技術的分類 差速離心 （一）制備性超離心 （二）分析性超離心 等密度離心 一般密度梯度離心法 密度梯度離心 采用不同的離心速度和離心時間，使 沉降速度不同 的顆粒在不同的離心速度及不同離心時間下分批分離的方法。 主要用于分離大小和密度差異較大的顆粒。 （一）制備性超離心 差速離心 (Differential centrifugation) 優(yōu)點 ： 操作簡單，離心后用傾倒法即可將上清夜與沉淀分開，并可使用容量較大的角式轉子。 缺點 ： ①分離效果差； ②壁效應嚴重； ③顆粒被擠壓。 密度梯度區(qū)帶離心法 密度區(qū)帶離心法 是樣品在一定 惰性梯度介質 中進行離心沉淀或沉降平衡，在一定離心力下把顆粒分配到梯度中某些特定位置上， 形成不同區(qū)帶 的分離方法。 密度梯度系統(tǒng)： 梯度介質有足夠大的溶解度，不與分離組分反應，不會引起分離組分的凝集、變性或失活。 樣品鋪在密度梯度溶液表面，離心后形成若干條界面清楚的不連續(xù)區(qū)帶。 優(yōu)點 ： ①分離效果好，可一次獲得較純顆粒； ②適應范圍廣，既能分離具有沉淀系數差的顆粒，又能分離有一定浮力密度的顆粒； ③顆粒不會積壓變形，能保持顆?；钚?，并防止已形成的區(qū)帶由于對流而引起混合。 缺點 ： ①離心時間較長； ②需要制備梯度； ③操作嚴格，不宜掌握。 （ 1）一般密度梯度離心法 差速區(qū)帶離心法（動態(tài)法或沉降速度法） （ Diensity gradient centrifugation） 根據分離的粒子在梯度液中沉降速度的不同，使具有不同沉降速度的粒子處于不同的密度梯度層內分成一系列區(qū)帶，達到彼此分離的目的。 離心過程中區(qū)帶的位置、形狀隨離心時間而改變 用于分離有一定沉降系數差的顆粒，與密度無關 把樣品鋪放在一個 連續(xù)的液體密度梯度 上，然后進行離心，并控制離心分離的時間，使得粒子完全 沉降之前 ，在液體梯度中移動而形成不連續(xù)分離區(qū)帶。該法僅用于分離有一定 沉降系數差 的粒子， 與粒子密度無關 。因此大小相同，密度不同的粒子 (如線粒體、溶酶體和過氧物酶體 )不能用此法分離。這種方法已用于 RNA— DNA混合物、核蛋白體亞單位和其他細胞成分的分離。 （ 2）等密度離心 （ Isopyic centrifugation） 指當不同顆粒存在 浮力密度差 時，在離心力作用下，顆?；?向下沉降 或 向上浮起 ，一直沿梯度移動到與其密度恰好相等的位置上（即等密度點），形成區(qū)帶而分離的方法。 處于等密度點的顆粒沒有重量， 區(qū)帶的位置、形狀均不受離心時間的影響 ，體系處于動態(tài)平衡。 差速區(qū)帶離心法和等密度離心法的區(qū)別 差速區(qū)帶離心法 等密度離心法 原理 依據粒子的沉降速率差異 被分離 依據粒子本身的密度差異 被分離 梯度 范圍 介質的密度小于樣品中各種粒子的密度 介質的密度大于待分離樣品中各種粒子的密度 時間 效應 長時間離心，所有待分離粒子都沉降在管底 長時間離心，各粒子停留在等密度位置形成區(qū)帶 等密度離心 差速區(qū)帶離心 （二）分析性超離心 分析性超速離心主要是為了研究生物大分子的沉降特性和結
教學課件相關推薦
鄂ICP備17016276號-1