蛋白質(zhì)分離技術(shù)ppt課件(編輯修改稿)
2025-02-13 09:11 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 常用的層析原理 親和層析 2022/2/11 Biochemistry Experiments 22 常用的層析原理 親和層析 2022/2/11 Biochemistry Experiments 23 常用的層析原理 凝膠過濾 ? 原理： 又叫分子篩層析，其原因是凝膠具有網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，小分子物質(zhì)能進(jìn)入其內(nèi)部，而大分子物質(zhì)卻被排除在外部。當(dāng)一混合溶液通過凝膠過濾層析柱時，溶液中的物質(zhì)就按不同分子量篩分開。 物質(zhì)進(jìn)入凝膠柱之后有兩種運動方式 ,垂直向下移動和無定向的擴(kuò)散運動。大分子物質(zhì)直徑大無法進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)，只能分布于顆粒間隙中向下移動快，而小分子物質(zhì)可擴(kuò)散到凝膠顆粒內(nèi)，因此向下移動慢。 2022/2/11 Biochemistry Experiments 24 凝膠過濾 原理 2022/2/11 Biochemistry Experiments 25 凝膠過濾 原理 2022/2/11 Biochemistry Experiments 26 相對分子質(zhì)量較大 的物質(zhì)由于直徑大于凝膠網(wǎng)孔 被完全排阻 在孔外， 只能在凝膠顆粒外的空間向下流動，因此流程較短，移動速度快；所以 首先流出 。 相對分子質(zhì)量較小 的物質(zhì)由于直徑小于凝膠網(wǎng)孔，可 完全滲透 進(jìn)入凝膠顆粒的網(wǎng)孔，在向下移動過程中，因此流程較長，移動速率慢；所以 最后流出 。 凝膠過濾 原理 2022/2/11 Biochemistry Experiments 27 凝膠過濾 原理 中等大小的分子 ，它們在凝膠顆粒內(nèi)外 部分滲透 ，滲透的程度取決于它們分子的大小，所以它們流出的時間介于二者之間，這樣 分子大的組分先流出，分子小的組分后流出。 這樣樣品經(jīng)過凝膠層析后，各個組分便按分子從大到小的順序依次流出，從而達(dá)到了分離的目的。 2022/2/11 Biochemistry Experiments 28 混合物中某一被分離成分在一定的凝膠層析柱內(nèi)的洗脫，通常用分配系數(shù) (Kd)來表示。其定義為： Kd=（ Ve一 V0） / Vi Ve，某一被分離物成分被洗脫時所用洗脫液的體積 Vo，凝膠顆粒間自由空間的總體積 Vi，膠顆粒內(nèi)部孔穴的總?cè)莘e 大分子物質(zhì)，其 Kd=0，小分子能全部進(jìn)人膠粒內(nèi)的Kd=1，中等大小分子， Kd在 O～ 1之間。 凝膠過濾 原理 2022/2/11 Biochemistry Experiments 29 凝膠過濾 原理 Ve Vo Kd = ———— Vi （ 1） Kd = 0時 ,Ve = Vo,意味著該分子完全被排阻于凝膠顆粒之外 ,全部分布于流動相里 ,在固定相分布為 0,而 最先流出 。 （ 2）當(dāng) Kd = 1時 ,Ve = Vo + Vi,意味著該分子完全不被排阻 ,可以自由地擴(kuò)散進(jìn)入凝膠顆粒內(nèi)部 ,它能均等地分布在流動相和固定相里 ,在兩相分配的比值為 1,而 最后流出 . （ 3）當(dāng) 0 Kd 1, Ve = Vo + ViKd為處于兩種極端行為 之間的分子 （ 4） Kd 1現(xiàn)象說明凝膠對組分有吸附作用 ,此時 VeVo + Vi,例如一些 芳香族化合物 的洗脫體積遠(yuǎn)遠(yuǎn)超出理論計算的最大值 ,這些化合物的 Kd 1如苯丙氨酸 、 酪氨酸和色氨酸 。 2022/2/11 Biochemistry Experiments 30 凝膠過濾 常用凝膠的結(jié)構(gòu)和性質(zhì) 常用的凝膠有： ?天然凝膠：瓊脂糖凝膠 ?人工合成凝膠 ： 葡聚糖凝膠 葡聚糖凝膠離子交換劑 聚丙烯酰胺凝膠 2022/2/11 Biochemistry Experiments 31 基本骨架是葡聚糖，以右旋葡萄糖為殘基的多糖，分子間主要是 α1,6糖苷鍵，分枝為 l， 3糖苷鍵，以 1氯 2， 3環(huán)氧丙烷為交聯(lián)劑
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