初級(jí)分離ppt課件(編輯修改稿)
2025-06-02 12:02 本頁(yè)面
【文章內(nèi)容簡(jiǎn)介】 求； 缺點(diǎn)：水解后溶液 pH降低 ， 在高 pH下產(chǎn)氨 ， 腐蝕性強(qiáng) ， 有異味 ， 有毒 ， 終產(chǎn)物必須除盡 。 次常用 Na2SO4 缺點(diǎn)：在 400C以下溶解度較低 ， 主要用于熱穩(wěn)定蛋白 。 B I o s e p a r a t I o n E n g I n e e r I n g B、溫度和 pH值 T ?， ? ?； T ? ， ? ?。 T影響 Cohn方程中的 ?值 T ?， ? ? ， S ? T ? ， ? ? ， S ? 特殊：高離子強(qiáng)度 B I o s e p a r a t I o n E n g I n e e r I n g ? 溶液 pH影響 ?值 pH接近 PI時(shí)， ?最小， S最小 B I o s e p a r a t I o n E n g I n e e r I n g 方法 : A、 “ Ks”分級(jí)鹽析法：在一定 pH值及溫度下 ， 改變鹽濃度 （ 即I） 達(dá)到沉淀的目的 。 B、 “ β”分級(jí)鹽析法：在一定 I下 ， 改變?nèi)芤旱?pH值及溫度達(dá)到沉淀的目的 。 C、 應(yīng)用：一般的初步分離用第一種方法 ，進(jìn)一步純化時(shí)用第二種方法 。 B I o s e p a r a t I o n E n g I n e e r I n g 鹽析操作方式及方法 1) 操作方式 ? 固體鹽加入 ? 飽和鹽溶液加入 2) 飽和度 3) 方法 ? 分步鹽析 ? 重復(fù)鹽析 ? 反抽提法 B I o s e p a r a t I o n E n g I n e e r I n g 鹽析沉淀法的特點(diǎn) 1) 沉淀?xiàng)l件溫和，不會(huì)引起生物物質(zhì)變性失活； 2) 非蛋白的雜質(zhì)夾帶沉淀很少； 3) 適用范圍廣； 4) 鹽份含量高。 B I o s e p a r a t I o n E n g I n e e r I n g 等電點(diǎn)沉淀法 1）定義 — 利用兩性生物物質(zhì)在等電點(diǎn)時(shí)溶解度最小而析出固相物的過(guò)程 2）沉淀機(jī)理 — 降低排斥電位和水化程度 3）鹽離子的影響 — 使實(shí)際等電點(diǎn) pI偏離（ 177。 ） ? 與陽(yáng)離子結(jié)合， pI升高 ? 與陰離子結(jié)合， pI降低 B I o s e p a r a t I o n E n g I n e e r I n g 等電點(diǎn)沉淀法中的 pH值作用于 β值而隱含在 Cohnx公式中 ， pI值通常在pH4~6范圍內(nèi)變化 ， 一般用無(wú)機(jī)酸（ 如鹽酸 、 磷酸和硫酸 ） 作沉淀劑 。 在蛋白質(zhì)疏水性比較大和結(jié)合水比較小時(shí)這種類型的沉淀更有效 。 為了提高等電點(diǎn)法的沉淀能力 ， 常將其與鹽析法 、 有機(jī)溶劑法或其他沉淀法一起使用 。 特點(diǎn)：沉淀?xiàng)l件溫和；不引入新的物質(zhì)；沉淀效果差。 最大缺點(diǎn)：無(wú)機(jī)酸會(huì)引起較大的蛋白質(zhì)不可逆變性的危險(xiǎn) 。 B I o s e p a r a t I o n E n g I n e e r I n g 有機(jī)溶劑沉淀法 定義 —— 在有機(jī)溶劑存在下，使目標(biāo)產(chǎn)物的溶解度降低而產(chǎn)生沉淀的過(guò)程 同鹽析一樣 ， 隨著沉淀劑 —— 有機(jī)溶機(jī)濃度的上升 ， 蛋白質(zhì)溶解度也呈指數(shù)規(guī)律下降 。 B I o s e p a r a t I o n E n g I n e e r I n g 機(jī)理： A、 有機(jī)溶劑沉淀法的機(jī)理是加入溶劑后 ， 會(huì)使 水溶液的介電常數(shù)降低 ， 而使蛋白質(zhì)分子間的靜電 引力 （ 庫(kù)侖力 ） 增大 ， 導(dǎo)致凝集和沉淀 。 B、 有機(jī)溶劑使蛋白質(zhì)溶劑化 ， 使原來(lái)與蛋白質(zhì)結(jié)合的水被溶劑所取代 ， 從而降低了蛋白質(zhì)溶解度 。 C、 丙酮
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