微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)教案-在線瀏覽
2025-06-14 13:20本頁面
【正文】 加拉紅、鏈霉素、1mol/LNaOH、1mol/LHCl、KNONaCl、K2HPO47H2O、FeSO4.2試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、pH試紙、棉花、牛皮紙、記號(hào)筆、線繩、紗布。其配方如下：牛肉膏3g，蛋白胨10g．NaCl5g，瓊脂1520g，水1000mL。牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶解后倒入大燒杯；也可放在稱量紙上稱量，隨后放人熱水中，牛肉膏便與稱量紙分離，立即取出紙片。2加熱溶解：在燒杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉網(wǎng)上，小火加熱，并用玻棒攪拌，待藥品完全溶解后再補(bǔ)充水分至所需量。3調(diào)pH：檢測培養(yǎng)基的pH，若pH偏酸，可滴加1滴1mol/LNaOH，邊加邊攪拌，并隨時(shí)用pH試紙檢測，直至達(dá)到所需pH范圍。pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂前。4過濾：液體培養(yǎng)基可用濾紙過濾，固體培養(yǎng)基可用4層紗布趁熱過濾，以利結(jié)果的觀察。分裝時(shí)可用三角漏斗以免培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上面造成污染。分裝入三角瓶內(nèi)以不超過其容積一半為宜。6加棉塞：試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)制作的棉塞。要使棉塞總長約3／5塞人試管口或瓶口內(nèi)，以防棉塞脫落。有時(shí)也可用試管帽或塑料塞代替棉塞。若培養(yǎng)基分裝于試管中，則應(yīng)先把試管扎成捆后，再于棉塞外包一層牛皮紙。8滅菌：℃濕熱滅菌20min。9擺斜面：滅菌后，如制斜面，則需趁熱將試管口端擱在一根長木條上，并調(diào)整斜度，使斜度的長度不超過試管總長度的1/2?；騼?chǔ)存于冰箱清潔的櫥內(nèi)，備用。五、問題和思考1配制培養(yǎng)基有哪幾個(gè)步驟?在操作過程中應(yīng)注意些什么問題?為什么?2培養(yǎng)基配制完成后，為什么必須立即滅菌?若不能及時(shí)滅菌應(yīng)如何處理？如何進(jìn)行無菌檢查，3試設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)對(duì)飲料進(jìn)行無菌檢查。2試管斜面的擱置方法七、注意事項(xiàng)稱藥品用的牛角匙不要混用，稱完藥品應(yīng)及時(shí)蓋緊瓶蓋。不同培養(yǎng)基各有配制特點(diǎn)，要注意具體操作。2用稀釋法分離細(xì)菌、放線茵和霉菌。4學(xué)習(xí)平板接種等無菌操作技術(shù)。2已滅菌的牛肉膏、高氏1號(hào)、土豆蔗糖固體培養(yǎng)基各1瓶。4無菌水(、帶玻璃珠) 1瓶、80％乳酸、10％酚液、95％乙醇。2制備稀釋液(1)制備土壤懸液：，迅速倒人帶玻璃珠的無菌水瓶中，振蕩510min,使土壤充分打散，即成為102的土壤懸液。注意：每一個(gè)稀釋度換用一支槍頭。2劃線分離：使用接種環(huán)，從待純化的菌落或待分離的斜面菌種中沾取少量菌樣，在相應(yīng)培養(yǎng)基平板中劃線分離，劃線的方法多樣，目的是獲得單個(gè)菌落。然后在9個(gè)平板中分別倒入已融化并冷卻至45—50℃的細(xì)菌培養(yǎng)基(圖222)，輕輕轉(zhuǎn)動(dòng)平板，使菌液與培養(yǎng)基混合均勻，冷疑后倒置，適溫培養(yǎng)。2涂抹平板計(jì)數(shù)法 涂抹平板計(jì)數(shù)法與混合法基本相同，所不同的是先將培養(yǎng)基熔化后趁熱倒入無菌平板中，待凝固后編號(hào)，（每個(gè)編號(hào)設(shè)三個(gè)重復(fù)）。在由低濃度向高濃度涂抹時(shí)，也可以不更換刮鏟。四、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和報(bào)告1記錄土壤稀釋分離結(jié)果，并計(jì)算出每克土壤中的細(xì)菌、放線曲和霉菌的數(shù)量。五、問題和思考1在測定土壤微生物含量中，除混菌法外還可用什么方法?2試設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn)，從土壤中分離出酵母菌，并進(jìn)行計(jì)數(shù)。六、注意事項(xiàng)1一般土壤中，細(xì)菌最多，放線菌及霉菌次之，而酵母菌主要見于果園及菜園土壤中，故從土壤中分離細(xì)菌時(shí)，要取較高的稀釋度，否則菌落連成一片不能計(jì)數(shù)。3放線菌的培養(yǎng)時(shí)間較長，故制平板的培養(yǎng)基用量可適當(dāng)增多。 (1)了解和學(xué)習(xí)水中細(xì)菌總數(shù)和大腸菌群的測定原理和測定意義。 (2)學(xué)習(xí)和掌握用稀釋平板計(jì)數(shù)法測定水中細(xì)菌總數(shù)的方法。 (3)學(xué)習(xí)和掌握水中大腸菌群的檢測方法。 水是微生物廣泛分布的天然環(huán)境。水中微生物的主要來源有：水中的水生性微生物(如光合藻類)、來自土壤徑流、降雨的外來菌群和來自下水道的污染物和人畜的排泄物等。國家飲用水標(biāo)準(zhǔn)規(guī)定，飲用水中大腸菌群數(shù)每升中不超過3個(gè)，細(xì)菌總數(shù)每mL不超過100個(gè)。 所謂細(xì)菌總數(shù)是指1mL或1g檢樣中所含細(xì)菌菌落的總數(shù)，所用的方法是稀釋平板計(jì)數(shù)法，由于計(jì)算的是平板上形成的菌落(colonyforming unit，cfu)數(shù)，故其單位應(yīng)是cfu/g(mL)。在正常情況下，腸道中主要有大腸菌群、糞鏈球菌和厭氧芽胞桿菌等多種細(xì)菌。目前，國際上已公認(rèn)大腸菌群的存在是糞便污染的指標(biāo)。多管發(fā)酵法可運(yùn)用于各種水樣的檢驗(yàn)，但操作繁瑣，需要時(shí)間長。 多管發(fā)酵法包括初(步)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)、平板分離和復(fù)發(fā)酵實(shí)驗(yàn)三個(gè)部分。 水樣接種于發(fā)酵管內(nèi)，37℃下培養(yǎng)，24小時(shí)內(nèi)小套管中有氣體形成，并且培養(yǎng)基混濁，顏色改變，說明水中存在大腸菌群為陽性結(jié)果，但也有個(gè)別其他類型的細(xì)菌在此條件下也可能產(chǎn)氣；此外產(chǎn)酸不產(chǎn)氣的也不能完全說明是陰性結(jié)果，在少量的情況下，也可能延遲到48小時(shí)后才產(chǎn)氣，此時(shí)應(yīng)視為可疑結(jié)果，因此，以上兩種結(jié)果均需繼續(xù)做下面兩部分實(shí)驗(yàn)，才能確定是否是大腸菌群。 平板分離： 平板培養(yǎng)基一般使用復(fù)紅亞硫酸鈉瓊脂（遠(yuǎn)藤氏培養(yǎng)基，Endo’s medium）或尹紅美藍(lán)瓊脂(eos in methylene blue agar,EMB agar),前者含有堿性復(fù)紅染料，在此作為指示劑，它可被培養(yǎng)基中亞硫酸鈉脫色，使培養(yǎng)基呈淡粉紅色，大腸菌群發(fā)酵乳糖后產(chǎn)生的酸和乙醛即和復(fù)紅反應(yīng)，形成深紅色復(fù)合物，使大腸菌群菌落變?yōu)閹Ы饘俟鉂傻纳罴t色。初發(fā)酵管24小時(shí)內(nèi)產(chǎn)酸產(chǎn)氣和48小時(shí)產(chǎn)酸產(chǎn)氣的均需在以上平板上劃線分離菌落。原理
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