微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)總結(jié)大全-在線瀏覽
2024-10-29 04:15本頁面
【正文】 2，蓋上蓋玻片后，(萬分之一毫升)。設(shè)五個中方格中的總菌數(shù)為A，菌液稀釋倍數(shù)為B，如果是25個中方格的計(jì)數(shù)板，則1mL菌液中的總菌數(shù)=A/525104B=50000AB（個）（三）器材1．菌種 釀酒酵母2．儀器或其他用具 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，蓋玻片，無菌毛細(xì)滴管。2．鏡檢計(jì)數(shù)室在加樣前，先對計(jì)數(shù)板的計(jì)數(shù)室進(jìn)行鏡檢。3．加樣品將清潔干燥的血細(xì)胞計(jì)數(shù)板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細(xì)滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細(xì)滲透作用自動進(jìn)入計(jì)數(shù)室，一般計(jì)數(shù)室均能充滿菌液。4．顯微鏡計(jì)數(shù)加樣后靜止5min，然后將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板置于顯微鏡載物臺上，先用低倍鏡找到計(jì)數(shù)室所在位置，然后換成高倍鏡進(jìn)行計(jì)數(shù)。在計(jì)數(shù)前若發(fā)現(xiàn)菌液太濃或太稀，需重新調(diào)節(jié)稀釋度后再計(jì)數(shù)。每個計(jì)數(shù)室選5個中格(可選4個角和中央的一個中格)中的菌體進(jìn)行計(jì)數(shù)。如遇酵母出芽，芽體大小達(dá)到母細(xì)胞的一半時(shí)，即作為兩個菌體計(jì)數(shù)。5．清洗血細(xì)胞計(jì)數(shù)板使用完畢后，將血細(xì)胞計(jì)數(shù)板在水龍頭用水沖洗干凈，切勿用硬物洗刷，洗完后自行晾干或用吹風(fēng)機(jī)吹干。若不干凈，則必須重復(fù)洗滌至干凈為止。A表示五個中方格中的總菌數(shù)；B表示菌液稀釋倍數(shù)。二平板菌落計(jì)數(shù)法（一）目的要求學(xué)習(xí)習(xí)近平板菌落計(jì)數(shù)的基本原理和方法。統(tǒng)計(jì)菌落數(shù)，根據(jù)其稀釋倍數(shù)和取樣接種量即可換算出樣品中的含菌數(shù)。因此平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果往往偏低。平板菌落計(jì)數(shù)法雖然操作較繁，結(jié)果需要培養(yǎng)一段時(shí)間才能取得，而且測定結(jié)果易受多種因素的影響，但是，由于該計(jì)數(shù)方法的最大優(yōu)點(diǎn)是可以獲得活菌的信息，所以被廣泛用于生物制品檢驗(yàn)(如活菌制劑)，以及食品、飲料和水(包括水源水)等的含菌指數(shù)或污染程度的檢測。2．培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。（四）操作步驟l．編號取無菌平皿9套，分別用記號筆標(biāo)明1010106。依次標(biāo)是1010101010106。將多余的菌液放回原菌液中。另取一支lml吸管插入10?1試管中來回吹吸菌懸液三次，進(jìn)一步將菌體分散、混勻。用此吸管吸取101菌液lmL，此即為100倍稀釋。放菌液時(shí)吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結(jié)果誤差較大。的稀釋菌懸液各lmL，對號放入編好號的無菌平皿中。圖15—3平板菌落計(jì)數(shù)操作步驟4．倒平板．盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或?yàn)R到平皿蓋上。待培養(yǎng)基凝固后，將平板倒置于37℃恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)。同一稀釋度的三個重復(fù)對照的菌落數(shù)不應(yīng)相差很大，否則表示試驗(yàn)不精確。由1010106三個稀釋度計(jì)算出的每毫升菌液中菌落形成單位數(shù)也不應(yīng)相差太大。一般以三個連續(xù)稀釋度中的第二個稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現(xiàn)的平均菌落數(shù)在50個左右為好，否則要適當(dāng)增加或減少稀釋度加以調(diào)整。二者操作基本相同，所不同的是后者先將牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基融化后倒平板，待凝固后編號，并于37℃左右的溫箱中烘烤30min，或在超靜工作臺上適當(dāng)吹干，然后用無菌吸管吸取稀釋好的菌液對號接種于不同稀釋度編號的平板上，并盡快用無菌玻璃涂棒將菌液在平板上涂布均勻，平放于實(shí)驗(yàn)臺上20～30min，使菌液滲入培養(yǎng)基表層內(nèi)，然后倒置37℃的恒溫箱中培養(yǎng)24～48h。五、實(shí)驗(yàn)報(bào)告1．結(jié)果2．將培養(yǎng)后菌落計(jì)數(shù)結(jié)果填入下表稀釋度104105106Cfu數(shù)/平板123平均123平均123平均每毫升中的cfu2．思考題(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?(2)要使平板菌落計(jì)數(shù)準(zhǔn)確，需要掌握哪幾個關(guān)鍵?為什么?(3)試比較平板菌落計(jì)數(shù)法和顯微鏡下直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)缺點(diǎn)及應(yīng)用。2．學(xué)習(xí)、掌握光電比濁計(jì)數(shù)法的操作方法。在一定的范圍內(nèi)，微生物細(xì)胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測出(圖154)。然后，以樣品液所測得的光密度，從標(biāo)準(zhǔn)曲線中查出對應(yīng)的菌數(shù)。本實(shí)驗(yàn)采用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)。但是，由于光密度或透光度除了受菌體濃度影響之外，還受細(xì)胞大小、形態(tài)、培養(yǎng)液成分以及所采用的光波長等因素的影響。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經(jīng)過最大吸收波長以及穩(wěn)定性試驗(yàn)來確定。圖15—4 比濁法測定細(xì)胞濃度的原理（三）器材1．菌種 釀酒酵母培養(yǎng)液2．儀器或其他用具 721型分光光度計(jì)，血細(xì)胞計(jì)數(shù)板，顯微鏡，試管，吸水紙，無菌吸管，無菌生理鹽水等。（2）調(diào)整菌液濃度 用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)培養(yǎng)24小時(shí)的釀酒酵母菌懸液，并用無菌生理鹽水分別稀釋調(diào)整為每毫升110210410610810101012106含菌數(shù)的細(xì)胞懸液。（3）測OD值 將1至7號不同濃度的菌懸液搖均勻后于560nm波長、1cm比色皿中測定OD值。2．樣品測定將待測樣品用無菌生理鹽水適當(dāng)稀釋，搖均勻后，用560nm波長、lcm比色皿測定光密度。各種操作條件必須與制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時(shí)的相同，否則，測得值所換算的含菌數(shù)就不準(zhǔn)確。（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告l．結(jié)果每毫升樣品原液菌數(shù)=從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的菌數(shù)稀釋倍數(shù)2．思考題(1)光電比濁計(jì)數(shù)的原理是什么?這種計(jì)數(shù)法有何優(yōu)缺點(diǎn)?(2)光電比濁計(jì)數(shù)在生產(chǎn)實(shí)踐中有何應(yīng)
環(huán)評公示相關(guān)推薦
鄂ICP備17016276號-1