微生物學(xué)實驗總結(jié)大全(參考版)
2024-10-29 04:15本頁面
【正文】 補考成績通過后只計及格。（2）、操作技術(shù)手法正確熟練（3）、脫色程度控制較好。（3）、正確觀察出鏡下細(xì)菌的特殊結(jié)構(gòu)。細(xì)菌在培養(yǎng)基中生長情況及細(xì)菌特殊結(jié)構(gòu)觀察（1）、正確描述固體培養(yǎng)基的菌落、菌苔。液體和半固體培養(yǎng)基的細(xì)菌接種方法（無菌操作）（1）、將菌種接種到液體培養(yǎng)基和半固體培養(yǎng)基內(nèi)。（2）、要求劃線分區(qū)正確，接種劃線手法正確、熟練。革蘭氏染色法（1）、口試回答細(xì)菌涂片的制作方法（2）、將一張已涂好的細(xì)菌玻片進行革蘭氏染色（3）、要求染色步驟及各項染色時間正確，操作熟練。（2）、要求操作方法、步驟正確，能準(zhǔn)確判斷結(jié)果。（2）、掌握血清對倍稀釋的原理及方法，能正確使用刻度吸管?？己说攸c：微免實驗課上課的實驗室考核內(nèi)容及要求如下：顯微鏡（油鏡）的使用和保護方法（1）、提供一張細(xì)菌玻片標(biāo)本，要求能正確使用油鏡觀察到細(xì)菌的基本形態(tài)?？己藘?nèi)容共8項，每位同學(xué)通過抽簽考其中的一項內(nèi)容。要求把題目和答案寫在實驗報告紙上，統(tǒng)一收齊后和第一次實驗報告一起送到我辦公室生科樓104。：是應(yīng)用結(jié)核菌素進行皮膚試驗來測定機體對結(jié)核分枝桿菌是否能引起遲發(fā)型超敏反應(yīng)（Ⅳ型變態(tài)反應(yīng)）的一種試驗材料：舊結(jié)核菌素、純蛋白衍生物(PPD)方法：前臂皮內(nèi)注射PPD5單位結(jié)果：注射后72h，紅腫硬節(jié)≤5mm陰性→未感染；＞ 5mm 陽性→已感染（接種BCG等）≥ 15mm 強陽性→活動性感染假陰性：感染初期、嚴(yán)重結(jié)核病患者、細(xì)胞免疫功能降低（麻疹、AIDS、腫瘤、免疫抑制劑)應(yīng)用：①選擇卡介苗接種對象和測定卡介苗接種后的免疫效果。原理：中和試驗方法：間接凝集結(jié)果：效價大于400單位為陽性意義：鏈球菌感染指標(biāo)或風(fēng)濕熱及其活動性的輔助診斷 test原理：用已知傷寒沙門菌O、H抗原，以及引起副傷寒的甲型副傷寒沙門菌、肖氏沙門菌和希氏沙門菌H抗原的診斷菌液與受檢血清作定量凝集試驗，測定受檢血清中有無相應(yīng)抗體及其效價的試驗。2．思考題(1)如果用活菌計數(shù)法制作生長曲線，你認(rèn)為會有什么不同？兩者各有什么優(yōu)缺點？(2)細(xì)菌生長繁殖所經(jīng)歷的四個時期中，哪個時期其代時最短？若細(xì)胞密度為103/ml，其密度高達(dá)2108/ml，計計算出其代時。但須注意的是使用的2支試管要很干凈，其透光程度愈接近，測定的準(zhǔn)確度愈高。2．分別在培養(yǎng)0、1116和20h，取出培養(yǎng)物試管按上述方法測定OD值。本操作步驟也可用簡便的方法代替：1．~5ml LB液的試管中、混勻后將試管直接插入分光光度計的比色糟中，比色糟上方用自制的暗盒將試管及比色暗室全部罩上，形成一個大的暗環(huán)境，另以1支盛有LB液但沒有接種的試管調(diào)零點，測定樣品中培養(yǎng)0h的OD值。4．比濁測定用未接種的LB液體培養(yǎng)基作空白對照，選用600nm波長進行光電比濁測定。2．接種(培養(yǎng)10~12h)轉(zhuǎn)入盛有50ml LB液的三角瓶內(nèi)，混合均勻后分別取5ml混合液放入上述標(biāo)記的11支無菌大試管中。3．儀器或其他用具 722型分光光度計，水浴振蕩搖床，無菌試管，無菌吸管等。如果需要，可根據(jù)公式1 klett units=OD/。也可以直接用試管或帶有測定管的三角瓶(圖155)測定“klett units”值的光度計。用于測定細(xì)菌細(xì)胞數(shù)量的方法已在上述實驗作了介紹。不同的細(xì)菌在相同的培養(yǎng)條件下其生長曲線不同，同樣的細(xì)菌在不同的培養(yǎng)條件下所繪制的生長曲線也不相同。將一定量的細(xì)菌轉(zhuǎn)入新鮮液體培養(yǎng)基中，在適宜的條件下培養(yǎng)細(xì)胞要經(jīng)歷延遲期，對數(shù)期、穩(wěn)定期和衰亡期四個階段。2．復(fù)習(xí)光電比濁法測量細(xì)菌數(shù)量的方法。3．根據(jù)所測得的光密度值，從標(biāo)準(zhǔn)曲線查得每毫升的含菌數(shù)。測定時用無菌生理鹽水作空白對照。比色測定時，用無菌生理鹽水作空白對照，并將OD值填入下表管號12345678細(xì)胞數(shù)106/ml光密度（OD）每管菌懸液在測定OD值時均必須先搖勻后再倒入比色皿中測定(4)以光密度(OD)值為縱坐標(biāo)，以每毫升細(xì)胞數(shù)為橫坐標(biāo)，繪制標(biāo)準(zhǔn)曲線。再分別裝入已編好號的1至7號無菌試管中。（四）操作步驟1．標(biāo)準(zhǔn)曲線制作（1）編號 取無菌試管7支，分別用記號筆將試管編號為7。另外，對于顏色太深的樣品或在樣品中還含有其他干擾物質(zhì)的懸液不適合用此法進行測定。因此，對于不同微生物的菌懸液進行光電比濁計數(shù)應(yīng)采用相同的菌株和培養(yǎng)條件制作標(biāo)準(zhǔn)曲線。光電比濁計數(shù)法的優(yōu)點是簡便、迅速，可以連續(xù)測定，適合于自動控制。制作標(biāo)準(zhǔn)曲線時，菌體計數(shù)可采用血細(xì)胞計數(shù)板計數(shù)，平板菌落計數(shù)或細(xì)胞干重測定等方法。因此，可用一系列已知菌數(shù)的菌懸液測定光密度，作出光密度—菌數(shù)標(biāo)準(zhǔn)曲線。二、基本原理當(dāng)光線通過微生物菌懸液時，由于菌體的散射及吸收作用使光線的透過量降低。(4)當(dāng)你的平板上長出的菌落不是均勻分散的而是集中在一起時，你認(rèn)為問題出在哪里?(5)用倒平板法和涂布法計數(shù)，其平板上長出的菌落有何不同?為什么要培養(yǎng)較長時間(48h)后觀察結(jié)果?三 光電比濁計數(shù)法一、目的要求1．了解光電比濁計數(shù)法的原理。，如果過少菌液不易涂布開，過多則在涂布完后或在培養(yǎng)時菌液仍會在平板表面流動，不易形成單菌落。平板菌落計數(shù)法的操作除上述傾注倒平板的方式以外，還可以用涂布平板的方式進行。平板菌落計數(shù)法，所選擇倒平板的稀釋度是很重要的。實際工作中同一稀釋度重復(fù)對照平板不能少于三個，這
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