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2024-10-29 04:15 本頁面
【正文】 注：經一次考核不及格者，可在全班同學考核結束后，允許補考一次。（2）、正確描述液體培養(yǎng)基中的細菌生長情況。（3）、無菌操作正確。（3）、無菌操作正確。（2）、掌握顯微鏡（油鏡）保護方法血清對倍稀釋法（1）、用生理鹽水將血清進行對倍稀釋，終濃度達到1/ 1/ 1 /8三個稀釋度。第五篇：微生物學實驗考核辦法本科微生物學實驗考核辦法考核方式：按學號順序逐一進場應考。用途：輔助診斷傷寒，副傷寒結果：考慮正常人群抗體水平動態(tài)觀察：恢復期效價增加≥4倍OIgM,出現早，維持時間短，特異性差HIgG,出現遲，維持時間長，特異性強O高H高腸熱癥可能性大O低H低排除O高H低早期或有交叉反應的其它沙門菌感染O低H高預防接種或曾患過傷寒(acidfast stain)：以5％石炭酸復紅加溫染色，再用3％鹽酸酒精脫色，然后用美藍復染，則分枝桿菌呈紅色(+)，其他細菌和背景物質為藍色()。(五)實驗報告1．結果(1)將測定的OD600值填入下表：培養(yǎng)時間對照 0 3 4 6 8 10 12 14 16 20光密度值OD600(2)繪制大腸桿菌的生長曲線。測定完畢后，取出試管置37℃繼續(xù)振蕩培養(yǎng)。3．培養(yǎng)將已接種的試管置搖床37℃振蕩培養(yǎng)(振蕩頻率250r/min)，分別培養(yǎng)0、1116和20h，將標有相應時間的試管取出，立即放冰箱中貯存，最后一同比濁測定其光密度值。圖15—5 帶側臂試管的三角燒瓶(三)器材1．菌種 大腸桿菌2．培養(yǎng)基 LB液體培養(yǎng)基70ml，分裝2支大試管(5ml/支)，剩余60ml裝入250ml的三角瓶。本實驗用分光光度計(spectrophotometer)進行光電比濁測定不同培養(yǎng)時間細菌懸浮液的OD值，繪制生長曲線。以培養(yǎng)時間為橫坐標，以細菌數目的對數或生長速率為縱坐標作圖所繪制的曲線稱為該細菌的生長曲線。（五）實驗報告l．結果每毫升樣品原液菌數=從標準曲線查得每毫升的菌數稀釋倍數2．思考題(1)光電比濁計數的原理是什么?這種計數法有何優(yōu)缺點?(2)光電比濁計數在生產實踐中有何應用價值?(3)本實驗為什么采用560nm波長測定酵母菌懸液的光密度?如果你在實驗中需要測定大腸桿菌生長的OD值，你將如何選擇波長?四 大腸桿菌生長曲線的測定(一)目的要求1．通過細菌數量的測量了解大腸桿菌的生物特征和規(guī)律，繪制生長線。2．樣品測定將待測樣品用無菌生理鹽水適當稀釋，搖均勻后，用560nm波長、lcm比色皿測定光密度。（2）調整菌液濃度 用血細胞計數板計數培養(yǎng)24小時的釀酒酵母菌懸液，并用無菌生理鹽水分別稀釋調整為每毫升110210410610810101012106含菌數的細胞懸液。光波的選擇通常在400~700nm之間，具體到某種微生物采用多少還需要經過最大吸收波長以及穩(wěn)定性試驗來確定。本實驗采用血細胞計數板計數。在一定的范圍內，微生物細胞濃度與透光度成反比，與光密度成正比，而光密度或透光度可以由光電池精確測出(圖154)。五、實驗報告1．結果2．將培養(yǎng)后菌落計數結果填入下表稀釋度104105106Cfu數/平板123平均123平均123平均每毫升中的cfu2．思考題(1)為什么融化后的培養(yǎng)基要冷卻至45℃左右才能倒平板?(2)要使平板菌落計數準確，需要掌握哪幾個關鍵?為什么?(3)試比較平板菌落計數法和顯微鏡下直接計數法的優(yōu)缺點及應用。一般以三個連續(xù)稀釋度中的第二個稀釋度倒平板培養(yǎng)后所出現的平均菌落數在50個左右為好，否則要適當增加或減少稀釋度加以調整。同一稀釋度的三個重復對照的菌落數不應相差很大，否則表示試驗不精確。圖15—3平板菌落計數操作步驟4．倒平板．盡快向上述盛有不同稀釋度菌液的平皿中倒入融化后冷卻至45℃左右的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基約15毫升/平皿，置水平位置迅速旋動平皿，使培養(yǎng)基與菌液混合均勻，而又不使培養(yǎng)基蕩出平皿或濺到平皿蓋上。放菌液時吸管尖不要碰到液面，即每一支吸管只能接觸一個稀釋度的菌懸液，否則稀釋不精確，結果誤差較大。另取一支lml吸管插入10?1試管中來回吹吸菌懸液三次，進一步將菌體分散、混勻。依次標是1010101010106。2．培養(yǎng)基 牛肉膏蛋白陳培養(yǎng)基。因此平板菌落計數的結果往往偏低。二平板菌落計數法（一）目的要求學習習近平板菌落計數的基本原理和方法。若不干凈，則必須重復洗滌至干凈為止。如遇酵母出芽，芽體大小達到母細胞的一半時，即作為兩個菌體計數。在計數前若發(fā)現菌液太濃或太稀，需重新調節(jié)稀釋度后再計數。3．加樣品將清潔干燥的血細胞計數板蓋上蓋玻片，再用無菌的毛細滴管將搖勻的釀酒酵母菌懸液由蓋玻片邊緣滴一小滴，讓菌液沿縫隙靠毛細滲透作用自動進入計數室，一般計數室均能充滿菌液。B（個）（三）器材1．菌種 釀酒酵母2．儀器或其他用具 血細胞計數板，顯微鏡，蓋玻片，無菌毛細滴管。每一個大方格邊長為lmm，則每一個大方格的面積為lmm2，蓋上蓋玻片后，(萬分之一毫升)。用血細胞計數板在顯微鏡下直接計數是一種常用的微生物計數方法。但此法的缺點是所測得的結果通常是死菌體和活菌體的總和。目前國內外常用的計菌器有：血細胞計數板、PeteroffHauser計菌器以及Hawksley
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