微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(參考版)
2025-04-07 23:23本頁面
【正文】 。抽出接種環(huán)，將試管塞上棉塞，最后再次灼燒接種環(huán)，則接種完畢。試管口在火焰上微燒一周，將管口上可能沾染的少量菌燒掉。右手拿接種環(huán)，將接種環(huán)可能進(jìn)入試管的部分在火焰上灼燒滅菌。將一支斜面菌種和一支待接的斜面培養(yǎng)基放在左手上，拇指壓住兩只試管，中指位于兩只試管之間，斜面向上，管口齊平。圖32 平板劃線圖33 斜面接種（三）斜面接種斜面接種的主要目的是獲得純種微生物的菌體，進(jìn)行短期保存。將劃好線的培養(yǎng)皿倒置于30186。將融化的培養(yǎng)基無菌操作倒入無菌的空培養(yǎng)皿中。C恒溫培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~36h，觀察結(jié)果。迅速蓋上皿蓋，平放在工作臺上，輕輕轉(zhuǎn)動，是培養(yǎng)基和稀釋的菌液充分混合均勻，冷卻后，即制成平板。倒平板上述操作的同時，將培養(yǎng)基加熱融化，再冷卻到40~50186。如圖（31）所示。四、實(shí)驗(yàn)內(nèi)容和步驟（一）梯度稀釋平板法制備土壤（或活性污泥）稀釋液準(zhǔn)確稱取土樣10g或活性污泥10ml，加入裝有90ml無菌水并帶有玻璃珠的三角瓶中，振蕩約20min，使土樣與水充分混勻，將細(xì)胞分散。（9）開蓋：氣排盡后，開蓋，冷卻。（7）保壓：通過通、 ~，維持20min。（5）排氣：繼續(xù)加熱，排氣5~10分鐘，使鍋內(nèi)的冷空氣徹底排出。（3）加蓋：蓋上滅菌鍋蓋，擰緊相對螺旋，打開排氣閥。 圖21 棉塞的制作過程2：滅菌鍋的操作（1）加水：向滅菌器內(nèi)加水，水要淹沒加熱管。棉塞的長度應(yīng)2/3在容器內(nèi)，1/3在容器外。五、思考題配制培養(yǎng)基的過程中應(yīng)該注意些什么問題？為什么？培養(yǎng)基配制好后，為什么必須立即滅菌？如何檢查滅菌后的培養(yǎng)基是無菌的？附1：棉塞的制作棉塞的作用一是防止雜菌污染，二是保證通氣良好。每組包扎一支1ml移液管、15只培養(yǎng)皿，待滅。C的培養(yǎng)箱中培養(yǎng)24~48h，檢查滅菌是否徹底。C左右，將試管口端擱在玻棒或其它合適高度的器具上，擱置的斜面長度以不超過試管總長的一半為宜。C，20min，高壓蒸汽滅菌。用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、配制日期。加塞：分裝完畢后，在試管口和三角瓶口塞上棉塞，以阻止外界微生物進(jìn)入并保證良好的通氣性能。分裝：將配制好的培養(yǎng)基分裝入三角瓶和試管中，三角瓶裝量不要超過容積的1/2，試管裝量不要超過試管高度的1/3，約為5ml。若偏堿，同法用1mol/L的HCl溶液調(diào)節(jié)。調(diào)節(jié)pH：用精密pH試紙測量培養(yǎng)基原始pH值。牛肉膏、蛋白胨可加熱促進(jìn)溶解，待全部溶解后，加水補(bǔ)足所需容量。按照配方，計(jì)算出每種藥品的需要量。C時凝固，通常不被微生物利用。瓊脂在大于96186。本次需要配制的培養(yǎng)基是為下次從土壤中分離細(xì)菌用的，所以選擇配制適合細(xì)菌生長的牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基。六、實(shí)驗(yàn)結(jié)果和思考題結(jié)果（1）繪制所觀察的一種或兩種微生物的形態(tài)，并測量其大小。（7）測數(shù)完畢，取下蓋玻片，用水將血球計(jì)數(shù)
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