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微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)指導(dǎo)(1010)(參考版)

2025-04-10 03:29本頁面
  

【正文】 五、實(shí)驗(yàn)報告記錄糯米甜酒或葡萄酒的發(fā)酵過程,評價所釀制酒的外觀、色、香、味和口感,闡述糯米酒或葡萄酒的發(fā)酵原理。四、注意事項(xiàng)(1)釀制糯米甜酒時糯米飯一定要煮熟煮透,不能太硬或夾生;米飯一定要涼適至35℃拌酒曲,否則會影響正常發(fā)酵。(4)放置2周后,可將葡萄皮撈起,并過濾。(2)把晾干的葡萄倒入玻璃罐中,按照3:1的比例加入白砂糖(可鋪一層葡萄加一層白砂糖,或把葡萄捏碎后加入白砂糖拌勻)(3)蓋好玻璃罐,放置。 2. 葡萄酒釀制(1)稱取一定量葡萄,用水洗凈后,晾干(表皮不能有水珠)。 (3)培養(yǎng)發(fā)酵 發(fā)酵2 d 便可聞到酒香味,開始滲出清液,34 d 滲出液越來越多,此時,把洞填平,讓其繼續(xù)發(fā)酵。加熱蒸熟成飯,即為甜酒培養(yǎng)基。 三、操作步驟1.甜酒制作(1)甜酒培養(yǎng)基稱取一定量優(yōu)質(zhì)糯米(糙糯米更好),用水淘洗干凈后,加水量為米水比1:1,加熱煮熟成飯。 (二)實(shí)驗(yàn)內(nèi)容糯米甜酒、葡萄酒的釀制。計(jì)算方法:選擇長出菌落數(shù)30300之間的培養(yǎng)皿進(jìn)行計(jì)數(shù), 按以下公式: 總菌數(shù)/g=同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)稀釋倍數(shù) 七、問題和思考1.在測定土壤微生物含量中,除涂布法外還用什么方法? 2.試設(shè)計(jì)實(shí)驗(yàn),從茶葉中分離出霉菌。 3.放線菌的培養(yǎng)時間較長,故制平板的培養(yǎng)基用量可適當(dāng)增多。 五、注意事項(xiàng) 1.一般土壤中,細(xì)菌最多,放線菌及霉菌次之.而酵母菌主要見于果園及菜園土壤中,故從土壤個分離細(xì)菌時,要取較高的稀釋度,否則菌落達(dá)成一片不能計(jì)數(shù)。 (2) 接種的方法是,用接種針沾取少量待接菌種.然后從柱狀培養(yǎng)基的中心穿入其底部(但不要穿透)、然席沿原刺人路線抽出接種針.注意接種針不要移動。(3) 接種后30℃恒溫培養(yǎng),細(xì)菌培養(yǎng)48 h,放線菌、霉菌培養(yǎng)至孢子成熟方可取出保存。 (三)斜面接種和穿刺接種 1.斜面接種 (1) 取新鮮固體斜面培養(yǎng)基.分別做好標(biāo)記(寫上菌名、接種日期、接種人等),然后用無菌操作方法,把待接菌種接入以上新鮮培養(yǎng)基斜面中。 (二)平板劃線分離微生物 1.劃線分離 使用接種環(huán),從待純化的菌落或待分離的斜面菌種中沾取少量菌樣.在相應(yīng)培養(yǎng)基平板中劃線分離,劃線的方法多樣,目的是獲得單個菌落,主要方法參見下圖。霉菌:取10 mL,分別接入相應(yīng)的PDA培養(yǎng)基中(每100 mL加入滅菌的乳酸1 mL),涂布均勻。 圖42 倒平板的方法 圖43 平板涂布菌(2)接種量和培養(yǎng)基 細(xì)菌:取10107兩管稀釋液各1 mL,分別接入相應(yīng)標(biāo)號的平皿中,每個稀釋度接入兩個牛肉膏瓊脂平板中,涂布均勻。注意:操作時管尖不能接觸液面,每一個稀釋度換用1支移液管,每次吸入土液后,要將移液管插入液面,吹吸3次,每次吸上的液面要高于一次,以減少稀釋中的誤差。 2.無菌操作制備土壤稀釋液 (1) 制備土壤懸液:稱土樣1 g,迅速倒入帶玻璃珠的無菌水瓶中(玻璃珠用量以充滿瓶底為最好),振蕩510 min使土樣充分打散,即成為102的土壤懸液。 無菌培養(yǎng)皿、土壤樣品、天平、稱量紙、藥勺、試管架、涂布器。 2. 培養(yǎng)基巳滅菌的牛肉膏、高氏1號、PDA固體培養(yǎng)基各1瓶。單菌落是由一個細(xì)胞繁殖而成的集合體,即是一個純培養(yǎng)。本實(shí)驗(yàn)利用稀釋倒平板法從土壤中分離細(xì)菌、放線菌和霉菌。 二、實(shí)驗(yàn)原理 從混雜的微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程成為微生物的分離與純化。 2.用平板劃線法分離微生物。2. 掌握常用的分離純化微生物的操作技術(shù)。 3.比較各種滅菌方法的原理及適用范圍。2. 記錄各種不同物品所用的滅菌方法及滅菌條件(溫度、壓力)。6.過濾除菌時應(yīng)注意檢查過濾裝置各連接處是否漏氣,以防污染。4. 使用滅菌鍋應(yīng)嚴(yán)格按照操作程序進(jìn)行,避免發(fā)生事故;滅菌時,操作者切勿擅自離開,待壓力下降到零后,才可打開鍋蓋。2. 不同培養(yǎng)基各有配制特點(diǎn),要注意具體操作。微量溶液過濾時,可用圖22的針頭式過濾器。為加快過濾速度, 一般用負(fù)壓抽氣過濾.即在自來水龍頭上裝一抽氣裝置,利用自來水流造成負(fù)壓。在抽洗液中加入數(shù)滴BaCl2扎,至不出現(xiàn)BaSO4沉淀時,即表示巳洗凈。其優(yōu)點(diǎn)是吸附量少,但每次使用后要洗凈再用。m)和6號(孔徑小于2 181。 玻璃濾器:是一種由玻璃制成的過濾漏斗,其過濾部分是由細(xì)玻璃粉燒結(jié)成的板狀構(gòu)造。溶液中的細(xì)菌通過石棉纖維的吸附和過濾而被去除,但對溶液中其他物質(zhì)的吸附性也大。其優(yōu)點(diǎn)是吸附性小,即溶液中的物質(zhì)損耗少,濾速快,每張濾膜只使用1次,不用清洗。m等), 181。m、 181。 (1)過濾器的種類 濾膜過濾器:由醋酸纖維素、硝酸纖維素等制成,有孔徑大小不同的多種規(guī)格( 181。 (5)取出滅菌物品 待電烘箱內(nèi)溫度降到70℃以下后,才能打開箱門,取出滅菌物品。 (3)恒溫 當(dāng)溫度升到所需溫度后, h。 (1)裝入待滅菌物品 預(yù)先將各種器皿用紙包好或裝入金屬制的培養(yǎng)皿筒、移液管筒內(nèi),然后放入電熱烘箱中。 (8)無菌檢查 將已滅菌培養(yǎng)基于37℃培養(yǎng)24 h,無雜菌生長,即可待用。本實(shí)驗(yàn)用121℃,20min滅菌。 (5)升壓 當(dāng)鍋內(nèi)空氣排凈時,即可關(guān)閉排氣閥,壓力開始上升。 (3)加蓋 將蓋上與排氣孔相連接的排氣軟管插人內(nèi)層滅菌桶的排氣槽內(nèi),擺正鍋蓋,對齊螺口,然后以同時旋緊相對的兩個螺栓的方式擰緊所有螺栓,并打開排氣閥。 (1)加水 將內(nèi)層滅菌桶取出,再向外層鍋內(nèi)加入適量的水,以水面與三角架相平為宜 (2)裝料 將裝料桶放回鍋內(nèi),裝入待滅菌的物品。g。2.鏈霉素的加入 鏈霉素受熱容易分解,所以臨用時,將培養(yǎng)基融化后待溫度降全45℃左右時才能加入。然后加入瓊脂13 g,加熱使瓊脂完全融化,同時補(bǔ)足應(yīng)有的水量。 用雙層潔凈紗布過濾去渣,在濾液中加葡萄糖(或蔗糖)20 g,加水補(bǔ)足1000 mL。去皮馬鈴薯200 g;葡萄糖20 g;瓊脂13 g;自來水1000 mL。 (2)pH 調(diào)節(jié)、分裝、包扎、滅菌及無菌檢查同牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基配制。待所有藥品完全溶解后.補(bǔ)充水分到所需的總體積。7H2O可先配成高濃度的貯備液后再加入,方法是先在100 mL水中加入1 g的FeSO4再加入其他成分依次溶解。7H2O g,瓊脂13 g, 蒸餾水1000 mL,pH 。3H2O g,MgSO4 2.高氏1號培養(yǎng)基高氏1號培養(yǎng)基是用于分離和培養(yǎng)放線菌的合成培養(yǎng)基。 (9)擺斜面 滅菌后,如制斜面,則需趁熱將試管口端擱在一根長木條上,并調(diào)整斜度,使斜面長度不超過試管總長的一半。 (8)滅菌 ℃濕熱滅菌20 min。 若培養(yǎng)基分裝于試管中,則應(yīng)先把試管扎成捆后,再于棉塞外包—層牛皮紙。有時也可用試管帽或塑料蓋代替棉塞。要使棉塞總長約3/5塞入試管口或瓶口內(nèi),以防棉塞脫落。 (6)加棉塞 試管口和三角瓶口塞上用普通棉花(非脫脂棉)制作的棉塞,棉塞制作方法則圖11。分裝入三角瓶內(nèi)以不超過其容積內(nèi)一半為宜。分裝時可用三角漏斗以免使培養(yǎng)基沾在管口或瓶口上面造成污染。供一般使用的培養(yǎng)基.此步可省略。pH的調(diào)節(jié)通常放在加瓊脂之前。
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