微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)總結(jié)大全-文庫吧資料
2024-10-29 04:15本頁面
【正文】 樣便于數(shù)據(jù)統(tǒng)計(jì)，減少誤差。5．計(jì)數(shù)培養(yǎng)48h后，取出培養(yǎng)平板，算出同一稀釋度三個(gè)平板上的菌落平均數(shù)，并按下列公式進(jìn)行計(jì)算，每毫升中菌落形成單位(cfu)=同一稀釋度三次重復(fù)的平均菌落數(shù)稀釋倍數(shù)5一般選擇每個(gè)平板上長有30~300個(gè)菌落的稀釋度計(jì)算每毫升的含菌量較為合適。由于細(xì)菌易吸附到玻璃器皿表面，所以菌液加入到培養(yǎng)皿后，應(yīng)盡快倒入融化并于已冷卻至45℃左右的培養(yǎng)基，立即搖勻，否則細(xì)菌將不易分散或長成的菌落連在一起，影響計(jì)數(shù)。，這樣容易加大同一稀釋度幾個(gè)重復(fù)平板間的操作誤差。3，取樣用三支1mL無菌吸管分別吸取10105和106?！溆嘁来晤愅?，整個(gè)過程如圖153所示。吹吸菌液時(shí)不要太猛太快，吸時(shí)吸管伸人管底，吹時(shí)離開液面，以免將吸管中的過濾棉花浸濕或使試管內(nèi)液體外溢。OptionsEmail Replies將101試管置試管振蕩器上振蕩，使菌液充分混勻。2．稀釋用lmL無菌吸管吸取lmL已充分混勻的大腸桿菌菌縣液(待測樣品)，此即為10倍稀釋。(稀釋度)各3套。3．儀器或其他用具lm1無菌吸管，無菌平皿，試管架，恒溫培養(yǎng)箱等。（三）器材1．菌種 大腸桿菌菌懸液。為了清楚地闡述平板菌落計(jì)數(shù)的結(jié)果，現(xiàn)在已傾向使用菌落形成單位(colonyforming units，cfu)而不以絕對菌落數(shù)來表示樣品的活菌含量。但是，由于待測樣品往往不易完全分散成單個(gè)細(xì)胞，所以，長成的一個(gè)單菌落也可來自樣品中的2～3或更多個(gè)細(xì)胞。（二）、基本原理平板菌落計(jì)數(shù)法是將待測樣品經(jīng)適當(dāng)稀釋之后，其中的微生物充分分散成單個(gè)細(xì)胞，取一定量的稀釋樣液接種到平板上，經(jīng)過培養(yǎng)，由每個(gè)單細(xì)胞生長繁殖而形成肉眼可見的菌落，即一個(gè)單菌落應(yīng)代表原樣品中的一個(gè)單細(xì)胞。各中格中菌數(shù)AB二室平均值菌數(shù)/ml12345第一室第二室2．思考題(1)根據(jù)你的體會，說明用血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的誤差主要來自哪些方面?應(yīng)如何盡量減少誤差．力求準(zhǔn)確?(2)某單位要求知道一種干酵母粉中的活菌存活率，請?jiān)O(shè)計(jì)1～2種可行的檢測方法。（五）實(shí)驗(yàn)報(bào)告l．結(jié)果將結(jié)果記錄于下表中。鏡檢，觀察每小格內(nèi)是否有殘留菌體或其他沉淀物。計(jì)數(shù)一個(gè)樣品要從兩個(gè)計(jì)數(shù)室中計(jì)得的平均數(shù)值來計(jì)算樣品的含菌量。位于格線上的菌體一般只數(shù)上方和右邊線上的。一般樣品稀釋度要求每小格內(nèi)約有5~10個(gè)菌體為宜。調(diào)節(jié)顯微鏡光線的強(qiáng)弱適當(dāng)，對于用反光鏡采光的顯微鏡還要注意光線不要偏向一邊，否則視野中不易舌清楚計(jì)數(shù)室方格線，或只見豎線或只見橫線。取樣時(shí)先要搖勻菌液；加樣時(shí)計(jì)數(shù)室不可有氣泡產(chǎn)生。若有污物，則需清洗，吹干后才能進(jìn)行計(jì)數(shù)。（四）操作步驟l．菌懸液制備以無菌生理鹽水將釀酒酵母制成濃度適當(dāng)?shù)木鷳乙?。B（個(gè)）同理，如果是16個(gè)中方格的計(jì)數(shù)板，1mL菌液中的總菌數(shù)=A/516104B=32000A圖15—1 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造（一）圖15—2 血細(xì)胞計(jì)數(shù)板構(gòu)造（二）；； 放大后的方格網(wǎng)，中間大方格為計(jì)數(shù)室；；計(jì)數(shù)時(shí)，通常數(shù)五個(gè)中方格的總菌數(shù)，然后求得每個(gè)中方格的平均值，再乘上25或16，就得出一個(gè)大方格中的總菌數(shù)，然后再換算成lml菌液中的總菌數(shù)。計(jì)數(shù)室的刻度一般有兩種規(guī)格，一種是一個(gè)大方格分成25個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成16個(gè)小方格(圖15—2)；另一種是一個(gè)大方格分成16個(gè)中方格，而每個(gè)中方格又分成25個(gè)小方格，但無論是哪一種規(guī)格的計(jì)數(shù)板，每一個(gè)大方格中的小方格都是400個(gè)。該計(jì)數(shù)板是一塊特制的載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個(gè)平臺；中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各列有一個(gè)方格網(wǎng)，每個(gè)方格網(wǎng)共分為九個(gè)大方格，中間的大方格即為計(jì)數(shù)室。另外兩種計(jì)菌器的使用方法可參看各廠商的說明書。目前已有一些方法可以克服這一缺點(diǎn)，如結(jié)合活菌染色微室培養(yǎng)（短時(shí)間）以及加細(xì)胞分裂抑制劑等方法來達(dá)到只計(jì)數(shù)活菌體的目的。顯微鏡直接計(jì)數(shù)法的優(yōu)點(diǎn)是直觀、快速、操作簡單。后兩種計(jì)菌器由于蓋上蓋玻片后，因此可用油浸物鏡對細(xì)菌等較小的細(xì)胞進(jìn)行觀察和計(jì)數(shù)。（二）基本原理顯微鏡直接計(jì)數(shù)法是將小量待測樣品的懸浮液置于一種特別的具有確定面積和容積的載玻片上(又稱計(jì)菌器)，于顯微鏡下直接計(jì)數(shù)的一種簡便、快速、直觀的方法。一 顯微鏡直接計(jì)數(shù)法（一）目的要求1．明確血細(xì)胞計(jì)數(shù)板計(jì)數(shù)的原理?？傊?，測定微生物生長量的方法很多，各有優(yōu)缺點(diǎn)，工作中應(yīng)根據(jù)具體情況要求加以選擇。測定細(xì)胞數(shù)目的方法有顯微鏡直接計(jì)數(shù)法(direct microscopic count)、平板菌落計(jì)數(shù)法(plate count)、光電比油法(turbidity estimation by spectrophotometer)、最大或然數(shù)法(most probable number MPN)以及膜過濾法(membrane filtration)等。本學(xué)期的實(shí)驗(yàn)讓我最感動是我們一個(gè)小組四名成員的精妙配合，造就了這學(xué)期的良好的微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)的結(jié)果總之，這學(xué)期的實(shí)驗(yàn)給我留下了深刻的印象，在最后，謝謝老師一學(xué)期的辛苦付出，為我未來的微生物學(xué)的學(xué)習(xí)和科研打好了良好的基礎(chǔ)。實(shí)驗(yàn)結(jié)束后要及時(shí)觀察結(jié)果，過了兩天才去觀察，結(jié)果部分平板已長出菌苔，對實(shí)驗(yàn)結(jié)果的觀察造成了很大的困難，所以，結(jié)果觀察同實(shí)驗(yàn)操作一樣重要。實(shí)驗(yàn)中的部分思想對未來的科研工作尤為重要，比如每一步都要設(shè)立空白對照組，在實(shí)驗(yàn)結(jié)果中做出比較討論，這在未來的自我進(jìn)行
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