微生物學(xué)實驗教案-文庫吧資料
2025-05-03 13:20本頁面
【正文】 擇長出菌落數(shù)30300之間的培養(yǎng)皿進行計數(shù)，技以下公式：總個數(shù)／g＝同一稀釋度幾次重復(fù)的菌落平均數(shù)x稀釋倍數(shù)2分別記錄平板劃線、平板接種的結(jié)果，并自我評價。將涂抹好的平板平放于桌上20—30min，使菌液滲透入培養(yǎng)基內(nèi)，然后將平板倒轉(zhuǎn)，保溫培養(yǎng)，至長出菌落后即可計數(shù)。再用無菌刮鏟將菌液在平板上涂抹均勻（圖223），每個稀釋度用一個滅菌刮鏟，更換稀釋度時需將刮鏟灼燒滅菌。至長出菌落后即可計數(shù)。3培養(yǎng)：方法同“土壤稀釋分離”(三) 平板接種培養(yǎng)1混合平板培養(yǎng)法 將無菌平板編上1010109號碼，每一號碼設(shè)置三個重復(fù)，用無菌吸管按無菌操作要求吸取109稀釋液各1ml放入編號109的3個平板中，同法吸取108稀釋液各lml放入編號108的3個平板中，再吸取107稀釋液各lml放入編號107的3個平板中（由低濃度向高濃度時，吸管可不必更換）。 (二)平板劃線分離微生物1倒平板：按無菌操作要求，在火焰旁操作，取融化并冷卻至不燙手的固體培養(yǎng)基(約50℃)，倒入無菌培養(yǎng)皿中，倒量以鋪滿皿底為限，平放桌上待其充分凝固，備用。(2)梯度稀釋：用移液器吸102的土壤懸液100ul，放入裝有900ul無菌水的EP管中，上下顛倒數(shù)次，即為103的稀釋液，如此重復(fù)，可依次制成103108的稀釋液。三、實驗方法(一)土壤稀釋分離1取土壤：取表層以下510ml處的土樣．放入滅菌的袋中備用，或放在4℃冰箱中暫存。3無菌培養(yǎng)皿12套、無菌EP管10支、土壤樣品、天平、稱量紙、藥匙、試管架、記號筆、涂布器、1000ul移液器、200ul移液器、20ul移液器、1000ul槍頭、200ul槍頭、20ul槍頭。二、實驗材料1金黃色葡萄球菌和普通變形菌斜面菌種。3用平板劃線法分離微生物。八、教學(xué)反饋實驗五 土壤的稀釋、分離、純化及無菌操作技術(shù)一、實驗?zāi)康暮蛢?nèi)容1學(xué)習(xí)從上壤中分離微生物的方法，學(xué)習(xí)無菌操作技術(shù)。調(diào)PH時要小心操作，避免回調(diào)。六、演示1培養(yǎng)基的分裝方法。四、實驗結(jié)果和報告記錄本實驗配制培養(yǎng)第的名稱、數(shù)量，并圖解說明其配制過程，指明要點。10無菌檢查：將滅菌的培養(yǎng)基放入37℃溫箱中培養(yǎng)2448h，無菌生長即可使用。如因特殊情況不能及時滅菌，則應(yīng)放人冰箱內(nèi)暫存。然后用記號筆注明培養(yǎng)基名稱、組別、日期。7包扎：加塞后，將三角瓶的棉塞外包一層牛皮紙或雙層報紙，以防滅菌時冷凝水沾濕棉塞。有些微生物需要更好的通氣，則可用8層紗布制成通氣塞。棉塞的形狀、大小和松緊度要合適，四周緊貼管壁，不留縫隙，才能起到防止雜菌侵入和有利通汽的作用。半固體培養(yǎng)基以試管高度的1/4為宜，滅菌后垂直待凝。分裝量：固體培養(yǎng)基約為試管高度的1／5，滅菌后制成斜面。5分裝：按實驗要求，可將配制的培養(yǎng)基分裝入試管或三角瓶內(nèi)。應(yīng)注意pH值不要調(diào)過頭，以免回調(diào)而影響培養(yǎng)基內(nèi)各離子的濃度。若偏堿，則用1mol/L HCl進行調(diào)節(jié)。若配制固體培養(yǎng)基，則將稱好的瓊脂放入已溶解的藥品中，再加熱融化，此過程中，需不斷攪拌，以防瓊脂糊底或溢出，最后補足所失的水分。蛋白胨極易吸潮，故稱量時要迅速。1稱藥品：按實際用量計算后，按配方稱取各種藥品放入大燒杯中。3 滅菌鍋三、實驗方法(一)牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基的配制牛肉膏蛋白胨培養(yǎng)基是一種應(yīng)用最廣泛和最普通的細菌基礎(chǔ)培養(yǎng)基。7H2O。3H2O、MgSO4（6）鏡檢：觀察染色結(jié)果。（4）脫色：除去殘水后，滴加95%酒精進行脫色約30秒，后立即用流水沖洗。（2）初染：在做好的涂面上滴加草酸銨結(jié)晶紫染液，染1分鐘，傾去染液，流水沖洗至無紫色。C中性（復(fù)合）染料：如伊紅、美蘭等，Wright染料和Gimsa染料等（常用于細胞核染色）。四、實驗方法和步驟附表1細菌染色法分類附表2 微生物染色常用染料A酸性染料：如酸性復(fù)紅、剛果紅、伊紅、藻紅、苯胺黑等。4革蘭氏染色液（結(jié)晶紫染液、盧戈氏碘液、95%乙醇、石碳酸復(fù)紅）5載玻片、蓋玻片、接種環(huán)、鑷子、酒精燈、火柴、玻璃鉛筆、蒸餾水等。三、實驗材料1大腸桿菌24h的斜面培養(yǎng)物。二、實驗原理1 革蘭氏染色的原理革蘭氏陽性菌的細胞壁主要有肽聚糖形成的網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)組成，在染色過程中，當(dāng)用95%乙醇處理時，由于脫水而引起網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)中的孔徑變小，細胞壁的通透性降低，使結(jié)晶紫碘復(fù)合物被保留在細胞壁內(nèi)而不易脫色，因此呈藍紫色。五、實驗報告油鏡使用的原理 繪制細菌形態(tài)六、思考題1鏡檢標(biāo)本時，為什么先用低倍鏡觀察，而不是直接用高倍鏡或油鏡觀察？2根據(jù)實驗體會，你認為制備染色標(biāo)本時，應(yīng)注意哪些事項？七、教學(xué)反饋 實驗三 細菌的革蘭氏染色一、實驗?zāi)康?掌握革蘭氏染色。（6）干燥：空氣中自然干燥或在酒精燈高處微微加熱。(4) 染色：在整個涂面上滴加齊氏石炭酸復(fù)紅，染色１分鐘。(2) 干燥：自然氣干或酒精燈高處微微加熱。簡單染色(1) 涂片:取兩塊干凈的載玻片，各滴一小滴生理鹽水于載玻片中央，用無菌操作分別挑取金黃色葡萄球菌和大腸桿菌于二載玻片的水滴中（每一種菌制一片），調(diào)勻并涂成薄膜。培養(yǎng)1218h的枯草芽孢桿菌和大腸桿菌以及金黃色葡萄球菌。經(jīng)染色后的細菌細胞與背景形成鮮明對比。學(xué)習(xí)染色的基本技術(shù)，二、實驗原理簡單染色的原理大多數(shù)微
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