微生物學(xué)實驗教案(10生物)-文庫吧資料
2025-05-01 12:51本頁面
【正文】 treptomyces hygroscopicus (5102)）斜面菌種；在馬鈴薯瓊脂平板上或用玻璃紙透析培養(yǎng)法培養(yǎng)3—4天的根霉（Rhizpus sp.）、青霉（Penicillum sp.）、曲霉（Aspergillus sp.）。此染色液制成的霉菌標本片的特點是：細胞不變形，具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長時間，溶液本身呈藍色，有一定染色效果。不同霉菌的繁殖菌絲可以形成不同的孢子。其個體比細菌和放線菌大得多，分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲。采用插片培養(yǎng)法也能觀察放線菌的個體形態(tài)。七、思考題為什么要求制片完全干燥后才能使用油鏡？如果你的涂片未經(jīng)熱固定，將會出現(xiàn)什么問題？如果加熱溫度過高、時間太長，又會怎樣呢？實 驗 教 案課題(項目)名稱: 放線菌、霉菌形態(tài)觀察計劃學(xué)時: 4 實驗類型: □ √ □ □ □授課日期: 2012 年 4 月 10 日 第 8 周 星期 二 第5/6/7/8 節(jié)實驗二 放線菌、霉菌形態(tài)觀察一、目的與要求學(xué)習(xí)并掌握觀察放線菌、霉菌形態(tài)的基本方法初步了解放線菌及四種常見霉菌的基本形態(tài)特征二、基本原理放線菌形態(tài)觀察放線菌自然生長的個體形態(tài)的觀察現(xiàn)多用玻璃紙瓊脂透析培養(yǎng)法。G+菌培養(yǎng)12h16h。用水沖洗后，應(yīng)吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴格規(guī)定。12．革蘭氏染色成敗的關(guān)鍵是酒精脫色。用綢布包好，放回鏡箱。二甲苯有毒，使用后馬上洗手。不要任意取下目鏡，謹防灰塵落入鏡筒。8．顯微鏡光學(xué)部件有污垢，可用擦鏡紙或綢布擦凈，切勿用手指、粗紙或手帕去擦，以防損壞鏡面。6．用單筒顯微鏡觀察標本，應(yīng)雙眼同時睜開，左眼觀察物像，右眼用以繪圖，左手調(diào)節(jié)焦距，右手移動標本或繪圖。4．觀察帶有液體的臨時標本時要加蓋片，不能使用傾斜關(guān)節(jié)，以免液體污染鏡頭和顯微鏡。3．使用時要嚴格按步驟操作，熟悉顯微鏡各部件性能，掌握粗、細調(diào)節(jié)鈕的轉(zhuǎn)動方向與鏡筒升降關(guān)系。2．觀察標本時，顯微鏡離實驗臺邊緣應(yīng)保持一定距離(5cm)，以免顯微鏡翻倒落地。六、注意事項1．搬動顯微鏡時，要一手握鏡臂，一手扶鏡座，兩上臂緊靠胸壁。②看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈?！?次。（13）實驗完畢后的處理：①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈。（11）晾干：將染好的涂片放空氣中晾干或者用吸水紙吸干。（9）復(fù)染：滴加蕃紅復(fù)染5min。（7）水洗：用水洗去碘液。（5）水洗：傾去染色液，用水小心地沖洗。（2）晾干：與簡單染色法相同。（7）鏡檢：先低倍觀察，再高倍觀察，并找出適當?shù)囊曇昂螅瑢⒏弑剁R轉(zhuǎn)出，在涂片上加香柏油一滴，將油鏡頭浸入油滴中仔細調(diào)焦觀察細菌的形態(tài)。（3）固定：手執(zhí)玻片一端，讓菌膜朝上，通過火焰23次固定（以不燙手為宜）（4）染色：將固定過的涂片放在廢液缸上的擱架上，加復(fù)紅染色12min。亦可直接在載玻片上制薄的涂面，注意取菌不要太多。簡單染色：（1）涂片：取干凈載玻片一塊，在載玻片的左、右各加一滴蒸餾水，按無菌操作法取菌涂片，左邊涂蘇云金桿菌，右邊涂大腸桿菌，做成濃菌液。6）將各部分還原，轉(zhuǎn)動物鏡轉(zhuǎn)換器，使物鏡頭不與載物臺通光孔相對，而是成八字形位置，再將鏡筒下降至最低，降下聚光器，反光鏡與聚光器垂直，用一個干凈手帕將接目鏡罩好，以免目鏡頭沾污灰塵。如油鏡已離開油面而仍未見到物象，必須再從側(cè)面觀察，重復(fù)上述操作。4）從接目鏡內(nèi)觀察，放大視場光闌及聚光鏡上的虹彩光圈（帶視場光闌油鏡開大視場光闌），上調(diào)聚光器，使光線充分照明。2）在玻片標本的鏡檢部位滴上一滴香柏油。（4）油鏡觀察油浸物鏡的工作距離（指物鏡前透鏡的表面到被檢物體之間的距離）很短，再加上一般光學(xué)顯微鏡的油浸物鏡沒有“彈簧裝置”，因此使用油浸物鏡時要特別細心，避免由于“調(diào)焦”不慎而壓碎標本片并使物鏡受損。若使用不同型號的物鏡，在轉(zhuǎn)換物鏡時要從側(cè)面觀察，避免鏡頭與玻片相撞。（3）高倍鏡觀察在低倍物鏡觀察的基礎(chǔ)上轉(zhuǎn)換高倍物鏡。將標本片放置在載物臺上，用標本夾夾住，移動推動器，使被觀察的標本處在物鏡正下方，轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)旋鈕，使物鏡調(diào)至接近標本處，用目鏡觀察并同時用粗調(diào)節(jié)旋鈕慢慢升起鏡筒（或下降載物臺），直至物像出現(xiàn)，再用細調(diào)節(jié)旋鈕使物像清晰為止。（2）低倍鏡觀察鏡檢任何標本都要養(yǎng)成必須先用低倍鏡觀察的習(xí)慣。4）調(diào)節(jié)光軸中心 顯微鏡在觀察時，其光學(xué)系統(tǒng)中的光源、聚光器、物鏡和目鏡的光軸及光闌的中心必須跟顯微鏡的光軸同在一直線上。光線較強時，用平面反光鏡，光線較弱時，用凹面反光鏡。3）調(diào)節(jié)光照 不帶光源的顯微鏡，可利用燈光或自然光通過反光鏡來調(diào)節(jié)光照，但不能用直射陽光，直射陽光會影響物像的清晰并刺激眼睛。三、器材活材料：培養(yǎng)1216h枯草桿菌（Bacillus subtilis）染色液和試劑：結(jié)晶紫（附二、（一）、3）、盧哥氏碘液（附二、（一）、4）、95%酒精、蕃紅（附二、（一）、5）、復(fù)紅（附二（一）、2）、二甲苯、香柏油器材：廢液缸、洗瓶、載玻片、接種杯、酒精燈、擦鏡紙、顯微鏡四、操作步驟顯微鏡的使用（1）觀
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