微生物學實驗教案(10生物)(編輯修改稿)
2025-05-22 12:51 本頁面
【文章內(nèi)容簡介】 ）水洗：用水洗去碘液。（8）脫色：將玻片傾斜，連續(xù)滴加95%乙醇脫色20—25s至流出液無色，立即水洗。（9）復染：滴加蕃紅復染5min。（10）水洗：用水洗去涂片上的蕃紅染色液。（11）晾干：將染好的涂片放空氣中晾干或者用吸水紙吸干。（12）鏡檢：鏡檢時先用低倍，再用高倍，最后用油鏡觀察，并判斷菌體的革蘭氏染色反應性。（13）實驗完畢后的處理：①將浸過油的鏡頭按下述方法擦拭干凈。—3次?！?次。注意擦鏡頭時向一個方向擦拭。②看后的染色玻片用廢紙將香柏油擦干凈。五、實驗報告給出菌的形態(tài)圖，并注明菌的革蘭氏染色的反應性。六、注意事項1．搬動顯微鏡時，要一手握鏡臂，一手扶鏡座，兩上臂緊靠胸壁。切勿一手斜提，前后擺動，以防鏡頭或其他零件跌落。2．觀察標本時，顯微鏡離實驗臺邊緣應保持一定距離(5cm)，以免顯微鏡翻倒落地。鏡柱與鏡臂間的傾斜角度不得超過45度，用完立即還原。3．使用時要嚴格按步驟操作，熟悉顯微鏡各部件性能，掌握粗、細調(diào)節(jié)鈕的轉(zhuǎn)動方向與鏡筒升降關系。轉(zhuǎn)動粗調(diào)節(jié)鈕向下時，眼睛必須注視物鏡頭。4．觀察帶有液體的臨時標本時要加蓋片，不能使用傾斜關節(jié)，以免液體污染鏡頭和顯微鏡。5．粗、細調(diào)節(jié)鈕要配合使用，細調(diào)節(jié)鈕不能單方向過度旋轉(zhuǎn)，調(diào)節(jié)焦距時，要從側(cè)面注視鏡筒下降，以免壓壞標本和鏡頭。6．用單筒顯微鏡觀察標本，應雙眼同時睜開，左眼觀察物像，右眼用以繪圖，左手調(diào)節(jié)焦距，右手移動標本或繪圖。7．禁止隨意擰開或調(diào)換目鏡、物鏡和聚光器等零件。8．顯微鏡光學部件有污垢，可用擦鏡紙或綢布擦凈，切勿用手指、粗紙或手帕去擦，以防損壞鏡面。9．凡有腐蝕性和揮發(fā)性的化學試劑和藥品，如碘、乙醇溶液、酸類、堿類等都不可與顯微鏡接觸，如不慎污染時，應立即擦干凈。不要任意取下目鏡，謹防灰塵落入鏡筒。10．使用油鏡觀察樣品后，隨即用二甲苯將油鏡鏡頭和載波片擦凈，以防其他的物鏡玻璃上沾上香柏油。二甲苯有毒，使用后馬上洗手。11．實驗完畢，要將玻片取出，用擦鏡紙將鏡頭擦拭干凈后移開，不能與通光孔相對。用綢布包好，放回鏡箱。切不可把顯微鏡放在直射光線下曝曬。12．革蘭氏染色成敗的關鍵是酒精脫色。如脫色過度，革蘭氏陽性菌也可被脫色而染成陰性菌；如脫色時間過短，革蘭氏陰性菌也會被染成革蘭氏陽性菌。脫色時間的長短還受涂片厚薄及乙醇用量多少等因素的影響，難以嚴格規(guī)定。13．染色過程中勿使染色液干涸。用水沖洗后，應吸去玻片上的殘水，以免染色液被稀釋而影響染色效果。14．選用幼齡的細菌。G+菌培養(yǎng)12h16h。若菌齡太老，由于菌體死亡或自溶常使革蘭氏陽性菌轉(zhuǎn)呈陰性反應。七、思考題為什么要求制片完全干燥后才能使用油鏡？如果你的涂片未經(jīng)熱固定，將會出現(xiàn)什么問題？如果加熱溫度過高、時間太長，又會怎樣呢？實 驗 教 案課題(項目)名稱: 放線菌、霉菌形態(tài)觀察計劃學時: 4 實驗類型: □ √ □ □ □授課日期: 2012 年 4 月 10 日 第 8 周 星期 二 第5/6/7/8 節(jié)實驗二 放線菌、霉菌形態(tài)觀察一、目的與要求學習并掌握觀察放線菌、霉菌形態(tài)的基本方法初步了解放線菌及四種常見霉菌的基本形態(tài)特征二、基本原理放線菌形態(tài)觀察放線菌自然生長的個體形態(tài)的觀察現(xiàn)多用玻璃紙瓊脂透析培養(yǎng)法。玻璃紙具有半透膜特性，其透光性與載玻片基本相同，采用玻璃紙瓊脂平板透析培養(yǎng)，能使放線菌生長在玻璃紙上，然后將長菌的玻璃紙剪取小片，貼放在載玻片上，用顯微鏡鏡檢可見到放線菌自然生長的個體形態(tài)。采用插片培養(yǎng)法也能觀察放線菌的個體形態(tài)。霉菌形態(tài)觀察霉菌的營養(yǎng)體是分枝的絲狀體。其個體比細菌和放線菌大得多，分為基內(nèi)菌絲和氣生菌絲。氣生菌絲中又可分化出繁殖絲。不同霉菌的繁殖菌絲可以形成不同的孢子。霉菌菌絲較粗大，細胞易收縮變形，且孢子容易飛散，所以制標本時常用乳酸石炭酸棉藍染色液。此染色液制成的霉菌標本片的特點是：細胞不變形，具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長時間，溶液本身呈藍色，有一定染色效果。利用培養(yǎng)在玻璃紙上的霉菌作為觀察材料，可以得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)；也可以直接挑取生長在平板中的霉菌菌體制水浸片觀察。三、器材活材料：培養(yǎng)57天的紫色直絲鏈霉菌（Streptomyces violaceorectus）的斜面菌種、吸水鏈霉菌5102（Streptomyces hygroscopicus (5102)）斜面菌種；在馬鈴薯瓊脂平板上或用玻璃紙透析培養(yǎng)法培養(yǎng)3—4天的根霉（Rhizpus sp.）、青霉（Penicillum sp.）、曲霉（Aspergillus sp.）。培養(yǎng)基：高氏一號瓊脂培養(yǎng)基（見附錄一、10）染色液和試劑：乳酸石炭酸棉藍染色液（附錄二、（一）、10）、50%酒精（V/V）。器材：剪刀、鑷子、載玻片、蓋玻片、解剖針、顯微鏡、無菌平皿、玻璃紙、 9ml無菌水若干支、酒精燈、火柴、接種環(huán)、玻璃刮鏟、1ml無菌吸管、載玻片。四、操作步驟放線菌形態(tài)觀察（1）將玻璃紙剪成培養(yǎng)皿大小，用舊報紙隔層疊好后滅菌。（2）將放線菌斜面菌種制成10—3的孢子懸液。（3）將高氏一號瓊脂
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