微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)講義-文庫吧資料
2025-04-10 23:23本頁面
【正文】 上稍加灼燒，左手打開培養(yǎng)皿蓋，右手迅速將培養(yǎng)基倒入培養(yǎng)皿中，每皿約倒入10ml，以鋪滿皿底為度。將試管頭部枕在木條上，使管內(nèi)培養(yǎng)基自然傾斜，凝固后即成斜面培養(yǎng)基。 (1) 制作斜面培養(yǎng)基。塞好棉塞的試管和錐形瓶應(yīng)蓋上厚紙用繩捆札，準(zhǔn)備滅菌。棉塞不要過緊過松，塞好后，以手提棉塞、管、瓶不下落為合適。制作棉塞時(shí)，要根據(jù)棉塞大小將棉花鋪展成適當(dāng)厚度，揪取手掌心大小一塊，鋪在左手拇指與食指圈成的圓孔中，用右手食指插入棉花中部，同時(shí)左手食指與姆指稍稍緊握，就會(huì)形成1個(gè)長棒形的棉塞。堵棉塞的主要目的是過濾空氣，避免污染。5．加棉塞。一般制作斜面培養(yǎng)基時(shí)，每只15150毫米的試管，約裝3～4ml(1/4～1/3試管高度)，如制作深層培養(yǎng)基，每只20220毫米的試管約裝12～15ml。分裝時(shí)，注意不要使培養(yǎng)基粘附管口或瓶口，以免浸濕棉塞引起雜菌污染。如果要制作平板培養(yǎng)基或液體、半固體培養(yǎng)基，則須將培養(yǎng)基分裝于錐形瓶內(nèi)。已過濾的培養(yǎng)基應(yīng)進(jìn)行分裝。用紗布過濾時(shí)，最好折疊成六層，用濾紙過濾時(shí)，可將濾紙折疊成瓦棱形，鋪在漏斗上過濾。3．過濾。2．調(diào)節(jié)pH值。配制固體培養(yǎng)基時(shí)，先將上述已配好的液體培養(yǎng)基煮沸，再將稱好的瓊脂加入，繼續(xù)加熱至完全融化。1．按照培養(yǎng)基的配方，稱取各種原料，依次加入使其溶解，最后補(bǔ)足所需水分。2．試劑：牛肉膏、蛋白胨、NaCl、瓊脂等。在微生物實(shí)驗(yàn)室中常用滅菌消毒方法有：1．干熱滅菌法：火焰滅菌(灼燒滅菌)、干熱滅菌2．濕熱滅菌：巴氏消毒、煮沸消毒、高壓蒸汽滅菌、間歇加熱滅菌、實(shí)罐滅菌。由于各類微生物對(duì)營養(yǎng)的要求不同，培養(yǎng)目的和檢測需要不同，因而培養(yǎng)基的種類很多。只有根據(jù)微生物的營養(yǎng)理論，結(jié)合研究對(duì)象的特殊營養(yǎng)要求、代謝特點(diǎn)及培養(yǎng)目的，才能設(shè)計(jì)或選擇出適宜的培養(yǎng)基。良好的培養(yǎng)基能充分發(fā)揮菌種的生物合成能力，以達(dá)到最佳的生產(chǎn)效果；相反，若培養(yǎng)基成分、配比或原料不合適，菌種的生長繁殖及發(fā)酵效果就差。設(shè)計(jì)和制作培養(yǎng)基是研究微生物生命活動(dòng)規(guī)律和利用微生物進(jìn)行工業(yè)發(fā)酵生產(chǎn)必須的重要基礎(chǔ)工作。二、實(shí)驗(yàn)原理人工配制的適合微生物生長繁殖或積累代謝產(chǎn)物的混合營養(yǎng)基質(zhì)稱為培養(yǎng)基。實(shí)驗(yàn)八 培養(yǎng)基的配制及濕熱滅菌；玻璃器皿的干熱滅菌一、目的要求1．明確培養(yǎng)基配制的原理，掌握制備培養(yǎng)的基本技術(shù)。 五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果 繪圖說明你所觀察到的霉菌形態(tài)特征。 4．在培養(yǎng)皿的濾紙上，加無菌的20％甘油數(shù)毫升，至濾紙濕潤即可停加。 2．將67 ml滅菌的馬鈴薯葡萄糖培養(yǎng)基倒入直徑為9cm的滅菌平皿中，待凝固后， cm2的瓊脂塊，用刀尖鏟起瓊脂塊放在已滅菌的培養(yǎng)皿內(nèi)的載玻片上，每片上放置2塊。置顯微鏡下先用低倍鏡觀察，必要時(shí)再換高倍鏡。三、實(shí)驗(yàn)器材 曲霉（Aspergillus sp.），青霉（Penicillium sp.），根霉（Rhizopus sp.），乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液，查氏培養(yǎng)基平板，無菌吸管，載玻片，蓋玻片，解剖針，鑷子，濾紙等。玻璃紙培養(yǎng)觀察法：為了得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)還可利用玻璃紙透析培養(yǎng)法進(jìn)行觀察。載玻片培養(yǎng)觀察法：此法是接種霉菌孢子于載玻片上的適宜培養(yǎng)基上，培養(yǎng)后用顯微鏡觀察。觀察霉菌的形態(tài)有多種方法，常用的有下列三種：直接制片觀察法： 是將培養(yǎng)物置于乳酸石炭酸棉藍(lán)染色液中，制成霉菌制片鏡檢。霉菌菌絲體(尤其是繁殖菌絲)及孢子的形態(tài)特征是識(shí)別不同種類霉菌的重要依據(jù)。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果繪圖描述放線菌形態(tài)六、思考題鏡檢時(shí)，你如何區(qū)分放線菌的基內(nèi)菌絲和氣生菌絲？實(shí)驗(yàn)七 霉菌個(gè)體、群體形態(tài)觀察一、目的要求 掌握觀察霉菌形態(tài)的基本方法，并觀察其形態(tài)特征。6．鏡檢。4．取一張干凈載玻片，通過燈焰稍微加熱，然后用針將菌苔表面輕輕地在玻片的不同部位壓幾次，在壓菌苔時(shí)應(yīng)避免和玻片摩擦攪亂印痕，影響觀察。2．取菌懸液一環(huán)，在平板培養(yǎng)基上劃線67次，置于2830 ℃的溫箱中培養(yǎng)3 d。在油鏡下觀察放線菌的菌絲(包括基內(nèi)菌絲和氣生菌絲)、孢子絲(有直形、波狀菜、螺旋狀等)和孢子形態(tài)。8．鏡檢。6．取插片一張，用擦片紙擦去玻片一面的放線菌，微熱固定。4．取無菌蓋玻片，傾斜的插入培養(yǎng)基中，每皿插入58片。2．用接種環(huán)取放線菌孢子于無菌水中，制成孢子懸液。 3．器皿：培養(yǎng)皿，載玻片、蓋玻片、無菌滴管、鑷子、接種環(huán)、小刀(或刀片)水浴鍋，顯微鏡，超凈工作臺(tái)，恒溫培養(yǎng)箱。2．培養(yǎng)基 放線菌的菌落早期絨狀同細(xì)菌菌落月牙狀相似，后期形成孢子菌落呈粉狀、干燥，有各種顏色呈同心圓放射狀。孢子也有球形、橢圓形、桿狀和瓜子狀等等。放線菌生長到一定階段，大部分氣生菌絲分化成孢子絲，通過橫割分列的方式產(chǎn)生成串的分生孢子。2．觀察放線菌的菌落特征、個(gè)體形態(tài)及其孢子的形態(tài)。2．報(bào)告計(jì)數(shù)結(jié)果。4． h后再進(jìn)行觀察，注意死細(xì)胞數(shù)量是否增加。2．取一塊蓋玻片，先將一邊與菌液接觸，然后慢慢將蓋玻片放下(以免產(chǎn)生氣泡)，使其蓋在菌液上，將
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