微生物學(xué)實驗講義-文庫吧在線文庫
【正文】 片法1．制備菌懸液和平板培養(yǎng)基同(一)。 二、實驗原理 霉菌可產(chǎn)生復(fù)雜分枝的菌絲體，分基內(nèi)菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產(chǎn)生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產(chǎn)生孢子。此法是利用玻璃紙的半透膜特性及透光性，將霉菌生長在覆蓋于瓊脂培養(yǎng)基表面的玻璃紙上，然后將長菌的玻璃紙剪取一小片，貼放在載玻片上用顯微鏡觀察。將培養(yǎng)皿置28℃培養(yǎng)一定時間后，取出載玻片置顯微鏡下觀察。培養(yǎng)基成分與配比合適與否，對微生物生長發(fā)育、物質(zhì)代謝、發(fā)酵產(chǎn)物積累和生產(chǎn)工藝都有很大影響。3．過濾除菌4．放射線滅菌其中，干熱天菌、高壓蒸汽滅菌方法主要是通過升溫使蛋白質(zhì)變性從而達到殺死微生物的效果三、實驗器材1．器材：試管、三角瓶、燒杯、量筒、玻璃棒、天平、牛角匙、高壓蒸汽滅菌鍋、pH試紙、牛皮紙、記號筆、麻繩、吸管、培養(yǎng)皿、電烘箱、鑷子等。用pH試紙(或pH電位計、氫離子濃度比色計)測試培養(yǎng)基的pH值，如不符合需要，可用10%HCl或10%NaOH進行調(diào)節(jié)，直到調(diào)節(jié)到配方要求的pH值為止。分裝時，一手捏松彈簧夾，使培養(yǎng)基流出，另一只手握住幾支試管或錐形瓶，依次接取培養(yǎng)基。棉塞應(yīng)采用普通新鮮、干燥的棉花制作，不要用脫脂棉，以免因脫脂棉吸水使棉塞無法使用?！?米左右的木條，厚度為1厘米左右。其法是先將洗凈并晾干的玻璃器皿用包裝紙包裝好，置于干燥箱中(注意需滅菌的物品不要靠箱壁附近，不要過擠)。絕對不可在高溫時打開箱門。若冷空氣排不干凈時，則壓力雖達規(guī)定數(shù)字，而其內(nèi)溫度卻實際不足，會影響滅菌的效果。二、實驗原理從混雜微生物群體中獲得只含有某一種或某一株微生物的過程稱為微生物分離與純化。1．確定其菌落觀察特征；2．室溫下靜置5～l0min，使菌液浸入培養(yǎng)基。若發(fā)現(xiàn)有雜菌，需再一次進行分離、純化，直到獲得純培養(yǎng)。3．培養(yǎng)4．挑菌落五、實驗結(jié)果分別記錄并描繪四大類微生物生長情況和培養(yǎng)特征。日光是一種復(fù)色光，有殺菌作用，許多微生物在日光的直接照射下易于死亡。根據(jù)這一特性，可將微生物接種在一種只缺少某種營養(yǎng)物的完全合適的瓊脂培養(yǎng)基中，倒成平板，再將所缺的營養(yǎng)物(例如各種碳源)點植于平板上，經(jīng)適溫培養(yǎng)，該營養(yǎng)物便逐漸擴散于植點周圍。2．C1在直射紫外線照射10min，C2照射20min，C3照射30min。3．將6根無菌牙簽，挑取6種糖對號點植，糖粒大小如小米粒。3．結(jié)果觀察。三、實驗材料大腸桿菌、95%、77%、40%的酒精，%、4%的石炭酸，%、%的新潔爾滅，%龍膽紫。輕則誘使細胞發(fā)生變異，重則導(dǎo)致死亡。二、實驗原理很多化學(xué)試劑有抑制或殺死微生物的作用(抑菌劑、消毒劑)，不同的微生物對不同的化學(xué)消毒劑或抑菌劑的反應(yīng)不同。 2．5四、方法步驟流程：倒平板→制備梯度稀釋液→涂布(或劃線法)→培養(yǎng)→挑單菌落→保存。獲得單個菌落的方法可通過稀釋涂布平板或平板劃線等計數(shù)來完成的。五、實驗結(jié)果寫出你所用過的35種消毒滅菌方法。這是一個密閉的耐高壓高溫的金屬容器，具有嚴密的蓋，容器內(nèi)的蒸汽不能漏出。這樣，可繼續(xù)升溫約510℃，即可將溫度控制在165170℃。鋪放培養(yǎng)基后放置15min左右，待培養(yǎng)基凝固后，再5個培養(yǎng)皿一疊，倒置過來，平放在恒溫箱里，24h后檢查，如培養(yǎng)基末長雜菌，即可用來培養(yǎng)微生物。棉塞的2/3應(yīng)在管內(nèi)或瓶內(nèi)，上端露出少許棉花便于拔取。每只錐形瓶裝入的培養(yǎng)基，一般以其容積的一半為宜。4．分裝。對蛋白胨、肉膏等物質(zhì)，需加熱溶解，加熱過程所蒸發(fā)的水分，應(yīng)在全部原料溶解后加水補足?！ ≡趯嶒炇抑信渲频倪m合微生物生長繁殖或累積代謝產(chǎn)物的任何營養(yǎng)基質(zhì)，都叫做培養(yǎng)基(Media)。2．學(xué)習(xí)并掌握微生物實驗室常用的兩種滅菌方法——濕熱滅菌法和干熱滅菌法。 （二）載玻片觀察法 1．將略小于培養(yǎng)皿底內(nèi)徑的濾紙放入皿內(nèi)，再放上U形玻棒，其上放一潔凈的載玻片，然后將二個蓋玻片分別斜立在載玻片的兩端，蓋上皿蓋，把數(shù)套（根據(jù)需要而定）如此裝置的培養(yǎng)皿疊起，包扎好， kg/cm2， ℃滅菌20min或干熱滅菌，備用。此染色液制成的霉菌標本片其特點是：(a)細胞不變形；(b)具有殺菌防腐作用，且不易干燥，能保持較長時間；(c)溶液本身呈藍色，有一定染色效果。5．將印片在燈焰上加熱固定，用石炭酸復(fù)紅染色1min，水洗，風(fēng)干。7．在蓋玻片上，滴加石炭酸復(fù)紅染色1 min，水洗風(fēng)干。二、實驗原理放線菌一般由分枝狀菌絲組成，它的菌絲可分為基內(nèi)菌絲(營養(yǎng)菌絲)、氣生菌絲或孢子絲三種。(二) 死活菌鑒別1．在干凈載玻片中央加一滴呂氏美藍染色液，以無菌操作用接種環(huán)挑取少量酵母菌體放于美藍液中，混合均勻。血球計數(shù)板是一塊特制的厚載玻片，其上由四條槽構(gòu)成三個平臺，中間較寬的平臺又被一短橫槽隔成兩半，每一邊的平臺上各刻有一個方格網(wǎng)，每個方格網(wǎng)共分為9個大方格，中間的大方格即為計數(shù)室。五、注意事項1．檢查細菌運動的載玻片和蓋玻片都要潔凈無油，否則將影響細菌的運動2．制水封片時菌液不可加得太多，過多的菌液會在蓋玻片下流動，因而在視野內(nèi)只見大量的細菌朝一個方向運動，從而影響了對細菌正常運動的觀察。(510個取平均)(二) 懸滴法觀察細菌運動性1．在潔凈蓋玻片周圍涂少許凡士林。觀察時，要適當減弱光線，增加反差，如果光線很強，細菌和周圍的液體就難以辨別。實驗四
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