微生物學(xué)實(shí)驗(yàn)講義-資料下載頁
2025-04-04 23:23本頁面
【正文】 環(huán)、無菌培養(yǎng)皿、顯微鏡、涂布器等。四、方法步驟流程：倒平板→制備梯度稀釋液→涂布(或劃線法)→培養(yǎng)→挑單菌落→保存。 (一) 平板涂布法1．倒平板。將培養(yǎng)基加熱溶化待冷至55～60℃時(shí)，分別倒平板，每種培養(yǎng)基倒35皿。倒平板的方法：右手持盛培養(yǎng)基的試管或三角瓶置火焰旁邊，用左手將試管塞或瓶塞輕輕地?fù)艹觯嚬芑蚱靠诒３謱?duì)著火焰；然后左手拿培養(yǎng)皿并將皿蓋在火焰附近打開一縫，迅速倒人培養(yǎng)基約15ml，加蓋后輕輕搖動(dòng)培養(yǎng)皿，使培養(yǎng)基均勻分布在培養(yǎng)皿底部，然后平置于桌面上，待凝后即為平板。2．制備土壤稀釋液。稱取土樣lg，放入盛10ml無菌水并帶有玻璃珠的三角燒瓶中，振搖約20min，使土樣與水充分混合，將細(xì)胞分散。用一支lml無菌吸管從中吸取1ml土壤懸液加入盛有9ml無菌水的大試管中充分混勻，然后用無菌吸管從此試管中吸取lml加入另一盛有9ml無菌水的試管中，混合均勻，以此類推制成1010101010106不同稀釋度的土壤溶液，注意：操作時(shí)管尖不能接觸液面，每一個(gè)稀釋度換一支試管。 3．涂布。將上述每種培養(yǎng)基的平板底面分別用記號(hào)筆寫上10105和106三種稀度，然后用無菌吸管分別由10小心地滴在對(duì)應(yīng)平板培養(yǎng)基表面中央位置，右手拿無菌涂棒平放在平板培養(yǎng)基表面上，將菌懸液先沿同心圓方向輕輕地向外擴(kuò)展，使之分布均勻。室溫下靜置5～l0min，使菌液浸入培養(yǎng)基。4．培養(yǎng)。將培養(yǎng)基平板倒置于28℃溫室中培養(yǎng)3～5d，肉膏蛋白胨平板倒置于37℃溫室中培養(yǎng)2～3d。5．挑菌落。將培養(yǎng)后長出的單個(gè)菌落分別挑取少許細(xì)胞接種到上述三種培養(yǎng)基斜面上，分別置28℃和37℃溫室培養(yǎng)。若發(fā)現(xiàn)有雜菌，需再一次進(jìn)行分離、純化，直到獲得純培養(yǎng)。(二) 平板劃線分離法1．倒平板。按稀釋涂布平板法倒平板，并用記號(hào)筆標(biāo)明培養(yǎng)基名稱、樣品編號(hào)和實(shí)驗(yàn)日期。 2．劃線。在近火焰處，左手拿皿底，右手拿接種環(huán)，挑取上述10l的土壤懸液一環(huán)在平板上劃線。劃線的方法很多，但無論采用哪種方法，其目的都是通過劃線將樣品在平板上進(jìn)行稀釋，使之形成單個(gè)菌落。3．培養(yǎng)4．挑菌落五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果分別記錄并描繪四大類微生物生長情況和培養(yǎng)特征。六、思考題為什么要將培養(yǎng)皿倒置培養(yǎng)？ 實(shí)驗(yàn)十 理化因素對(duì)微生物的影響；生長譜法測(cè)定微生物營養(yǎng)要求 一、目的要求1．了解常用化學(xué)藥品對(duì)微生物的作用。2．了解紫外線對(duì)微生物的作用。3．學(xué)習(xí)生長譜法測(cè)定微生物營養(yǎng)要求的基本原理和方法。二、實(shí)驗(yàn)原理很多化學(xué)試劑有抑制或殺死微生物的作用(抑菌劑、消毒劑)，不同的微生物對(duì)不同的化學(xué)消毒劑或抑菌劑的反應(yīng)不同。此外，濃度、作用時(shí)間、環(huán)境條件不同，效果也不相同。有些消毒劑在濃度極低的條件下，反而有刺激微生物的作用。故殺菌劑的濃度及作用時(shí)間的確定是重要的，應(yīng)試驗(yàn)確定。日光是一種復(fù)色光，有殺菌作用，許多微生物在日光的直接照射下易于死亡。紫外線對(duì)微生物也有明顯的致死作用。紫外線對(duì)細(xì)胞的有害作用是由于細(xì)胞中很多物質(zhì)(如核酸，嘌呤，嘧啶等)對(duì)紫外線的吸收能力很強(qiáng)，而所吸收的能量能破壞DNA的結(jié)構(gòu)。最明顯的是誘導(dǎo)胸腺嘧啶二聚體的生成，從而抑制DNA的復(fù)制。輕則誘使細(xì)胞發(fā)生變異，重則導(dǎo)致死亡。紫外線雖有較強(qiáng)的殺菌力，但穿透力弱，即使一薄層玻璃或水層就能將大部分紫外線濾除。因此紫外線適用于表面滅菌和空氣滅菌。為了使微生物生長、繁殖，必須供給所需要的碳源、氮源、無機(jī)鹽、微量元素、生長因子等，如果缺少其中一種，微生物便不能生長。根據(jù)這一特性，可將微生物接種在一種只缺少某種營養(yǎng)物的完全合適的瓊脂培養(yǎng)基中，倒成平板，再將所缺的營養(yǎng)物(例如各種碳源)點(diǎn)植于平板上，經(jīng)適溫培養(yǎng)，該營養(yǎng)物便逐漸擴(kuò)散于植點(diǎn)周圍。該微生物若需要此種營養(yǎng)物，便在這種營養(yǎng)物擴(kuò)散處生長繁殖，微生物繁殖之處便出現(xiàn)圓形落圈，即生長圖形，故稱此法為生長譜法。這種方法可以定性、定量的測(cè)定微生物對(duì)各種營養(yǎng)物質(zhì)的需要。在微生物育種和營養(yǎng)缺陷型的鑒定中也常用此法。三、實(shí)驗(yàn)材料大腸桿菌、95%、77%、40%的酒精，%、4%的石炭酸，%、%的新潔爾滅，%龍膽紫。四、操作步驟(一) 消毒劑的抑菌試驗(yàn)1．用生理鹽水配制各種消毒劑不同濃度的溶液，將滅過菌的小濾紙片放在消毒及溶液中浸泡1min。2．，取消毒劑作用過的濾紙片對(duì)號(hào)貼在平板上，37℃培養(yǎng)24h后觀察菌體的生長情況。(二) 紫外線殺菌試驗(yàn)1．用大腸桿菌涂皿4個(gè)分別標(biāo)記CCCC4以無菌操作換上預(yù)先準(zhǔn)備好的中央刻有“M”字母樣的無菌黑色硬紙蓋。2．C1在直射紫外線照射10min，C2照射20min，C3照射30min。照射完畢后換上原來的平皿蓋。C4不照射作對(duì)照。上述所有平皿于37℃下培養(yǎng)24h后觀察結(jié)果。3．結(jié)果觀察。觀察平皿面上是否有圖案紙的細(xì)菌生長的圖象。(三) 生長譜法測(cè)定微生物營養(yǎng)要求1．24h的大腸桿菌斜面用無菌水洗下，制成菌懸液。2．將合成培養(yǎng)基約20ml，溶化后冷到50℃左右加入1ml大腸桿菌懸液，搖勻，立即傾注于直徑為12 cm的無菌培養(yǎng)皿中，待充分凝固后，在平板背面用記號(hào)筆劃分為六個(gè)區(qū)，并標(biāo)明要點(diǎn)植的各種糖類。3．將6根無菌牙簽，挑取6種糖對(duì)號(hào)點(diǎn)植，糖粒大小如小米粒。4．倒置于37 ℃溫室培養(yǎng)18～24h，觀察各種糖周圍有無菌落圈。五、實(shí)驗(yàn)結(jié)果觀察實(shí)驗(yàn)結(jié)果，測(cè)量抑菌圈大小，比較各種消毒劑抑菌效果六、思考題影響抑（殺）菌圈大小的因素有哪些？抑（殺）菌圈的大小能否準(zhǔn)確的反映消毒劑抑菌能力的強(qiáng)弱？19
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