【正文】 庖肉培養(yǎng)基中生長后，肉湯渾濁，肉渣不被消化，變成粉紅色，產(chǎn)生大量氣體，使液面固體石蠟推向上方。3. 產(chǎn)氣莢膜桿菌在牛乳培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象產(chǎn)氣莢膜桿菌在牛乳培養(yǎng)基中的生長時，能分解糖產(chǎn)酸、產(chǎn)氣。產(chǎn)生的酸能把酪蛋白凝固，產(chǎn)生的大量氣體使凝固的酪蛋白呈蜂窩狀，大量氣體形成的高壓使酪蛋白和隔絕氧氣的凡士林石蠟沖向試管口，氣勢洶涌，稱為“洶涌發(fā)酵”現(xiàn)象，為本菌的特點之一。3．破傷風(fēng)桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌、肉毒桿菌在高層瓊脂培養(yǎng)基中的生長現(xiàn)象分別把破傷風(fēng)桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌加入內(nèi)融化（60攝氏度）了瓊脂的試管中，冷凝、培養(yǎng)后觀察結(jié)果：（1）破傷風(fēng)桿菌：在高層瓊脂中生長后，產(chǎn)生少量氣體，瓊脂中下層有少量氣泡。（2）產(chǎn)氣莢膜桿菌：在高層瓊脂中生長后，產(chǎn)生大量氣體，沖散凝固的瓊脂，將瓊脂推向試管口。4. 常用厭氧培養(yǎng)方法的介紹厭氧培養(yǎng)的方法很多，主要利用氣體交換、還原劑、催化劑等方法使培養(yǎng)基保持無氧的環(huán)境和還原的狀態(tài)。1．庖肉培養(yǎng)基培養(yǎng)法原理：庖肉培養(yǎng)基內(nèi)含肉渣、不飽和脂肪酸、谷胱甘肽等物質(zhì)，表面由凡士林隔絕空氣。其中，不飽和脂肪酸在氧化時可以消耗試管內(nèi)的氧氣，谷胱甘肽作為一種還原劑可以使培養(yǎng)基中的氧化還原電勢降低，有利于厭氧菌的生長。方法：取置備好的庖肉培養(yǎng)基在火焰上微加熱，使凡士林熔化，在無菌條件下將厭氧菌接種，完畢后再微加熱，最后將培養(yǎng)基直立于試管架上，使凡士林密封后，在37溫箱中培養(yǎng)。2．焦性沒食子酸法原理：焦性沒食子酸與堿性溶液能迅速大量的吸收氧氣，生成棕色的焦性沒食子，它可以在任何密閉容器中快速造成無氧的環(huán)境。（100毫升容器中：1克焦性沒食子酸+2毫升0。5克/毫升碳酸氫鈉）方法：平皿法：在血平板上接種好厭氧菌，在皿蓋上鋪好薄紗布，將焦性沒食子酸0，5克置于紗布上，滴1毫升碳酸氫鈉，立刻將接種好的血平板扣在上面，并用熔化的石蠟密封四周，置37攝氏度溫箱中培養(yǎng)。試管法：將厭氧菌接種于小試管內(nèi)，并在一大試管內(nèi)放入有焦性沒食子酸的玻璃珠，滴入碳酸氫鈉，迅速把小試管放入大試管中去，并用橡膠塞塞緊，石蠟封口，置37攝氏度溫箱中培養(yǎng)。3．厭氧罐法原理：厭氧罐是有塑料、有機(jī)玻璃或金屬構(gòu)成的圓形容器，安裝有壓力表和通氣閥，可以抽換氣體，適合于厭氧菌的培養(yǎng)。方法：抽氣換氣法：適合于實驗室使用。將接種好細(xì)菌的平板或試管放入?yún)捬豕拗校瑫r放入催化劑（鈀）和指示劑（美蘭）。擰緊蓋子，用真空泵抽氣，當(dāng)指針到零時，灌入高純氮氣，如此反復(fù)2~3次，最后一次加入氫氣和二氧化碳的混合氣體。封閉，37攝氏度培養(yǎng)。氣袋發(fā)生袋法：適合于床邊接種和野外厭氧菌培養(yǎng)。除不需真空泵和氣體瓶外，其他設(shè)備與抽氣法相同。利用兩種藥片：一種是枸櫞酸和小蘇打，另一種是硼氫化鈉。前者遇水釋放二氧化碳，后者遇水釋放氫氣。4．厭氧袋法將接種好的平板放入裝有發(fā)生管和美蘭指示劑管的透明不透氣塑料袋內(nèi)，擠出袋內(nèi)空氣，將袋口扎緊，然后折斷發(fā)生管，產(chǎn)生的二氧化碳和氫氣使氣袋膨脹，出現(xiàn)水滴。半小時后，袋內(nèi)化學(xué)反應(yīng)完成，袋內(nèi)已無游離氧，此時折斷美蘭指示劑管，美蘭仍為無色，表明厭氧環(huán)境形成，可以人工厭氧培養(yǎng)。 實驗十二 結(jié)核桿菌結(jié)核桿菌為細(xì)長分枝桿菌，有分枝生長趨勢，不易著色，經(jīng)加溫或延長時間后著色。一旦著色后又能抵抗鹽酸酒精的脫色，故又稱為抗酸桿菌。實驗?zāi)康模?. 掌握結(jié)核桿菌的形態(tài)和染色特點。2. 了解結(jié)核桿菌的培養(yǎng)特性。3. 掌握抗酸染色法的操作和結(jié)果判斷。實驗材料：1. 結(jié)核桿菌抗酸染色示教片，結(jié)核桿菌在改良羅氏培養(yǎng)基的培養(yǎng)物，含結(jié)核桿菌的痰液。2．試劑：石炭酸復(fù)紅染液、3%鹽酸酒精、堿性美蘭3．器具：顯微鏡、載玻片、酒精燈、試管夾、接種環(huán)實驗內(nèi)容：1. 結(jié)核桿菌的形態(tài)和染色特性油鏡下：結(jié)核桿菌為細(xì)長或略帶彎曲的桿菌，有的呈分枝狀。單個存在或聚集成團(tuán)。菌體被復(fù)紅染成紅色，其他細(xì)菌及背景物質(zhì)呈藍(lán)色。2. 結(jié)核桿菌的培養(yǎng)特性固體培養(yǎng)基的形態(tài)：結(jié)核桿菌在接種的羅氏培養(yǎng)基上，37攝氏度培養(yǎng)4~6周，可出現(xiàn)乳白色或米黃色顆粒，表面粗糙，邊緣不整齊，較為干燥堅硬，形似花菜狀的菌落。液體培養(yǎng)基內(nèi)的生長情況：結(jié)核桿菌為專性需氧菌，在液體培養(yǎng)基中呈皺襞狀表皮生長。3. 抗酸染色法（1）涂抹標(biāo)本的制備在無菌條件下，用接種環(huán)取含有結(jié)核桿菌的少許痰液，均勻涂抹于載玻片上；自然干燥后；通過火焰固定。（2）抗酸染色①初染：將石炭酸復(fù)紅滴于方框中，使標(biāo)本被充分浸潤，置于酒精燈火焰上方8厘米處，微微加熱，當(dāng)有水蒸氣冒出時，可再加少許石炭酸復(fù)紅，防止干涸，但也不能沸煮，如此加熱持續(xù)5分鐘。冷卻后用水沖洗，甩干。②脫色：用3%的鹽酸酒精數(shù)滴浸潤脫色，直至涂片無紅色染液脫下為止。然后用水輕輕沖洗，甩干。③復(fù)染：加美蘭1~2滴，染色1分鐘，水洗，甩干，吸干。④油鏡觀察：結(jié)果見上節(jié)形態(tài)描述。附：改良羅氏培養(yǎng)基：，，（），甘油6ml，溶于300ml蒸餾水中。再加入馬鈴薯淀粉15g，沸水內(nèi)加熱，邊熱邊攪拌成糊狀。無菌操作將卵白、卵黃一起打成全卵液，取500ml加入。最后加2%孔雀綠溶液10ml，充分混合。分裝于滅菌的中試管內(nèi)，85℃60分鐘間歇滅菌2次。實驗報告：1. 繪破傷風(fēng)桿菌、產(chǎn)氣莢膜桿菌形態(tài)圖，并注明染色性和放大倍數(shù)。2. 記錄抗酸染色的步驟和繪染色結(jié)果圖，注明染色性和放大倍數(shù)。實驗十三 炭疽芽胞桿菌炭疽桿菌引起人、動物共患的炭疽病，屬烈性傳染病。本菌能在有氧的條件下產(chǎn)生芽胞。有毒菌株在機(jī)體內(nèi)或含血清的培養(yǎng)基中可形成莢膜。實驗?zāi)康模赫J(rèn)識炭疽桿菌的形態(tài)結(jié)構(gòu)。實驗內(nèi)容：炭疽桿菌的鏡下形態(tài)觀察（示教）本菌是革蘭氏陽性粗大桿菌。菌體兩端平截、無鞭毛。新鮮標(biāo)本涂片，常呈短鏈狀排列，培養(yǎng)后形成竹節(jié)樣排列的長鏈。芽胞橢圓形，位于菌體中央。在陳舊培養(yǎng)物中可見游離的芽胞，有毒株可形成莢膜。實驗報告：繪出炭疽桿菌的形態(tài)圖，注意菌體大小、形態(tài)，芽胞的形狀及位置。實驗十四 其他細(xì)菌一、支原體支原體沒有細(xì)胞壁，呈高度多形性，能通過細(xì)菌濾器，可用人工培養(yǎng)基培養(yǎng)增殖的一類最小的原核細(xì)胞型微生物。實驗?zāi)康模赫莆罩гw菌落的形態(tài)特征。實驗內(nèi)容：支原體菌落觀察（示教）將支原體菌落置低倍鏡下觀察，可見菌落呈圓形，菌落中心有一個致密的中心區(qū)，著色深，邊緣整齊，色淺淡較透明，形似“油煎蛋”樣。姬姆薩染色呈淡紫色。二、螺旋體螺旋體是介于細(xì)菌與原蟲之間的一類細(xì)長、柔軟、彎曲成螺旋狀、運動活潑的原核細(xì)胞型微生物。種類較多，對人類致病的主要有鉤端螺旋體、梅毒螺旋體、回歸熱螺旋體。實驗?zāi)康模?. 認(rèn)識鉤端螺旋體的形態(tài)特點。2. 掌握鍍銀染色檢查法實驗內(nèi)容：1. 鉤端螺旋體形態(tài)觀察（示教）鉤端螺旋體經(jīng)Fontana氏鍍銀染色，油鏡下的視野背景為淡黃棕色，螺旋體呈棕褐色至棕黑色。菌體纖細(xì)，螺旋致密而規(guī)則，一端或兩端彎曲成問號狀或C、S形。 2. 牙垢中的螺旋體觀察（鍍銀染色法）（1）取玻片加生理鹽水1滴于中央，用牙簽取牙垢少許與鹽水均勻作一涂片。（2）待涂片干燥后滴加固定液，固定1~2min后水洗。（3）滴加媒染劑，加溫至有蒸汽出現(xiàn)，作用30min，水沖洗。（4）加硝酸銀染液，微加溫，約30s，水沖洗，待干后鏡檢。鏡下牙垢中螺旋體呈棕褐色或黑褐色，有3~10個稀疏不規(guī)則的螺旋，呈波狀。屬疏螺旋體（奮森氏螺旋體）。附：鍍銀染色液的配置（1）羅吉固定液：冰醋酸1ml，甲醛液2ml，蒸餾水100ml。（2）鞣酸媒染液：鞣酸5g，石炭酸1g，蒸餾水100ml。（3）硝酸銀染液：硝酸銀5g，蒸餾水100ml。臨用前取硝酸銀染液20ml，逐滴加入100g/L氫氧化銨液，至產(chǎn)生棕褐色沉淀，搖后又能重新完全溶解，微現(xiàn)乳白色為適度。實驗報告：1. 繪出典型的支原體菌落圖。2. 繪出鉤體的形態(tài)圖。實驗十五 病原性真菌真菌是一大類不含葉綠素，無根、莖、葉，由單細(xì)胞或多細(xì)胞組成的真核細(xì)胞型微生物。大部分真菌對人類有益，能引起人類疾病的病原性真菌主要包括淺部真菌和深部真菌。實驗?zāi)康模河^察真菌的基本形態(tài)及菌落特點，了解淺部及深部真菌的檢查方法。實驗內(nèi)容：一、常見單細(xì)胞真菌的形態(tài)觀察（示教）新型隱球菌墨汁負(fù)染色片：可見菌體呈球形，大小不一，有很厚的莢膜，包圍在菌體周圍，透明發(fā)亮，并可見發(fā)芽的菌體。白色念珠菌菌體形態(tài)：用患者的棉拭子標(biāo)本常法涂片，革蘭氏染色，鏡檢。顯微鏡下可見菌體呈卵圓形，較葡萄球菌大25倍，細(xì)胞出芽伸長而成假菌絲，在假菌絲生長點上有芽生孢子及沿假菌絲頂端生長的大而圓的厚膜孢子。二、皮膚絲狀菌的檢查材料：病人的甲屑、皮屑或毛發(fā)、10%KOH溶液、載玻片、蓋玻片、小鑷子、普通光學(xué)顯微鏡等。方法：采標(biāo)本：用鈍刀在手、足、體癬損害部位邊緣輕輕刮取皮屑，甲癬可用小刀刮取病損指（趾）甲深層碎屑。制片：用小鑷子取少許皮（甲）屑標(biāo)本置于載玻片中央，滴12滴10%KOH溶液，覆加一蓋玻片，在火焰上緩慢加熱，以加速角質(zhì)溶解，使標(biāo)本透明，然后輕輕加壓使成薄片，驅(qū)走氣泡并吸去周圍溢液。鏡檢：先用低倍鏡觀察有無真菌菌絲或孢子，再用高倍鏡觀察菌絲、孢子的特征。鏡檢時光線應(yīng)稍弱，使視野稍暗。陽性標(biāo)本常可查見分支菌絲或孢子。三、真菌的培養(yǎng)材料：菌種、沙保氏培養(yǎng)基、平皿、載玻片、蓋玻片。方法：一般培養(yǎng)：分別將新型隱球菌、白色念珠菌、絮狀表皮癬菌接種于沙保氏培養(yǎng)基，于22℃28℃下培養(yǎng)（深部真菌可培養(yǎng)于37℃環(huán)境），一周后觀察菌落特征。真菌菌落在形態(tài)上可分為三大類：酵母型菌落：與細(xì)菌菌落相似，圓形、白色、邊緣整齊、表面光滑濕潤。類酵母型菌落：同酵母型菌落，圓形、較大、白色，但菌落根部有假菌絲長入培養(yǎng)基內(nèi)。絲狀菌落：是多細(xì)胞真菌的菌落形式。有許多疏松的菌絲體構(gòu)成，菌落呈棉絮狀、絨毛狀或粉末狀，菌落中央有皺折，外圍有放射狀溝。其正面和背景又可顯示各種不同顏色。小培養(yǎng)（玻片法）：在無菌平皿中先傾注1015ml沙保葡萄糖瓊脂，待凝固后，再將瓊脂塊移放在滅菌的載玻片上，然后在小塊培養(yǎng)基四邊接種已分純的真菌菌種，蓋上無菌蓋玻片，移入有一定濕度的無菌平皿內(nèi)，置22℃28℃孵育。動態(tài)觀察生長過程，根據(jù)菌絲和孢子的特點鑒定真菌類別。 實驗十六 病毒實驗?zāi)康模毫私獠《镜姆蛛x和培養(yǎng)特性實驗內(nèi)容：觀看病毒的分離和培養(yǎng)錄象31 / 3