【正文】 （3）調pH 檢測培養(yǎng)基的pH，若pH偏酸，可滴加1 mol/L NaOH，邊加邊攪拌，并隨時用pH試紙檢測，直至達到所需pH范圍。 （2）加熱溶解 在燒杯中加入少于所需要的水量，然后放在石棉網上，小火加熱，并用玻棒攪拌，待藥品完全溶解后再補充水分至所需量。牛肉膏可放在小燒杯或表面皿中稱量，用熱水溶解后倒入大燒杯；也可放在稱量紙上稱量，隨后放入熱水中，牛肉膏便與稱量紙分離，立即取出紙片。其配方如下: 牛肉膏3 g，蛋白胨l0 g， NaCl 5 g，瓊脂13 g, 水1000 mL。包裝后的培養(yǎng)皿和塑料管須經滅菌之后才能使用。2．滅菌前玻璃器皿和塑料管的包裝培養(yǎng)皿由一蓋一底組成一套，可用報紙將幾套培養(yǎng)皿包成一包，或者將幾套培養(yǎng)皿直接置于特制的鐵皮圓筒內，加蓋滅菌。移液管先用含有洗滌劑的水浸泡，再用自來水及蒸餾水沖洗。四、操作步驟（一）玻璃器皿的洗滌和包裝1．玻璃器皿的洗滌玻璃器皿在使用前必須洗刷干凈。7H2O、1%鏈霉素溶液。3H2O、MgSO4過濾除菌是通過機械作用濾去液體或氣體中的細菌、真菌孢子等的方法，適用于酶液、抗生素等不耐熱溶液的滅菌。細胞內的蛋白質凝固性與其本身的含水量有關，在菌體受熱時，當環(huán)境和細胞內含水量越大，則蛋白蛋凝固就越快，反之含水量越少，凝固緩慢。培養(yǎng)用的玻璃器皿通常采用干熱滅菌法。培養(yǎng)基或其他液體的滅菌一般是用高壓蒸汽滅菌法（又稱濕熱滅菌）。瓊脂在96100℃融化，46℃以下凝固。%的瓊脂配制為半固體培養(yǎng)基，加入12%的瓊脂配制為固體培養(yǎng)基。培養(yǎng)基中一般含有微生物所必需的碳源、氮源、能源、無機鹽、生長因子及水分等。 2．高壓蒸汽滅菌法、干熱滅菌法、過濾除菌法。3. 掌握各種滅菌方法的操作步驟。 圖24 根霉假根的培養(yǎng)實驗三 培養(yǎng)基的配制、消毒和滅菌一、實驗目的和內容（一）實驗目的1. 明確配制培養(yǎng)基的原理，了解消毒和滅菌的原理。此為制成的載玻片濕室，置28℃恒溫培養(yǎng)35 d。 （5）倒保濕劑 每皿倒入約3 mL 20％的無菌甘油，使皿內的濾紙完全潤滑，以保持皿內濕度。 （3）加培養(yǎng)基 用無菌細口滴管吸取少量融化約60℃的培養(yǎng)基，滴加到載玻片的接種處．培養(yǎng)基液應滴得圓而薄， cm(滴加量一般以1/2小滴為宜)。 （2）取菌接種 用接種環(huán)挑取少量待觀察的霉菌孢子至濕室內的載玻片上，每張載玻片可接同一菌種的孢子兩處。 (2) 搭片及培養(yǎng)在接種后的洞面上放一無菌蓋玻片，平板倒置于28℃，培養(yǎng)37 d。 同時，在另一半未經接種的部位以同樣方式插入數塊蓋玻片，然后接種少量5406菌孢子至蓋玻片一側的基部，但僅接種于其中央位置約占蓋玻片寬度的一半左右，以免菌絲蔓延至蓋玻片的另一側，將插片平板倒置于28℃，培養(yǎng)37d。②先插片后接種：用平板培養(yǎng)基的另一半面積進行。 七、問題和思考l．用插片法和搭片法如何制備放線菌標本，其主要優(yōu)點是什么?可否用此法觀察其他微生物?為什么?2．酵母菌的假菌絲是怎樣形成的?與霉菌的真菌絲有何區(qū)別?3. 什么叫載玻片濕室培養(yǎng)? 它適用于觀察怎樣的微小物，有何優(yōu)點?附錄: (—) 插片法和搭片法培養(yǎng)放線菌1．插片法(圖23A) (1) 制平板、接種用冷卻至約50℃的高氏1號瓊脂培養(yǎng)基倒平板（每皿約20 mL）。2. 繪制酵母菌細胞。 2．通過微加熱增加酵母的死亡率，易于觀察死亡細胞。只要用低倍鏡就能觀察到假根及從根上分化出的孢子囊梗、孢子囊、孢囊孢子以及兩個假根間的匍匐菌絲，觀察時注意調節(jié)焦距以看清各種構造。鏡檢。繪圖?？蓮呐囵B(yǎng)1620 h開始，連續(xù)觀察，了解孢子的萌發(fā)、菌絲體的生長分化和子實體的形成過程?？梢姷窖恐辰湍感纬傻呐汗?jié)狀假菌絲，裂殖酵母則形成竹節(jié)狀假菌絲(圖42)。細胞無色，液泡呈紅色。 (3) 在一個視野里計數死細胞和活細胞，共計數56個視野。(二) 酵母菌的形態(tài)觀察1．酵母菌的活體染色觀察及死亡率的測定 (1) 以無菌水洗下PDA斜面培養(yǎng)的釀酒酵母菌苔，制成菌懸液。注意放線菌的基內菌絲、氣生菌絲的粗細和色澤差異。 透明膠帶、剪刀、圓形濾紙片、細口滴管、鑷子。 2. 試劑％美藍染色液、石炭酸復紅染色液、％美藍染色液（ mol/L磷酸緩沖液配制）、碘液、％的中性紅染色液、5％孔雀綠，%沙黃液、95％乙醇、乳酸苯酚固定液、棉藍染色液、20％甘油。霉菌自然生長狀態(tài)下的形態(tài)，常用載玻片觀察；此外，為了得到清晰、完整、保持自然狀態(tài)的霉菌形態(tài)還可利用玻璃紙透析培養(yǎng)法進行觀察。霉菌菌絲和孢子的寬度通常比細菌和放線菌粗得多，可用低倍顯微鏡觀察。霉菌可產生分枝的菌絲體，分基內菌絲和氣生菌絲，氣生菌絲生長到一定階段分化產生繁殖菌絲，由繁殖菌絲產生孢子。用美藍對酵母的活細胞進行染色時，由于細胞的新陳代謝作用，細胞內具有較強的還原能力，能使美藍由藍色的氧化型變?yōu)闊o色的還原型。大多數酵母菌以出芽方式進行無性繁殖，有的分裂繁殖；有性繁殖是通過接合產生子囊孢子。通過設計各種培養(yǎng)和觀察方法如插片法、搭片法、玻璃紙法、印片法等，可保持放線菌自然生長狀態(tài)下的形態(tài)特征，便于觀察上述3種菌絲和孢子。在油鏡下觀察，放線菌的孢子有球形、橢圓、桿狀或柱狀。在顯微鏡下直接觀察時，氣絲處在上層、基絲在下層，氣絲色暗，基絲較透明。并進一步分化產生孢子絲及孢子?；z生長到一定階段還能向空氣中生長出氣生菌絲（ 二、實驗原理放線菌是一類主要呈菌絲狀生長和以孢子繁殖的革蘭氏陽性細菌，常見放線菌大多能形成菌絲體。 2. 觀察酵母菌的個體形態(tài)和假菌絲。3. 了解霉菌形態(tài)，掌握微生物載玻片濕室培養(yǎng)方法。 七、問題和思考 1．涂片后為什么要進行固定，固定時應注意什么? 2. 用油鏡便于觀察細菌的依據是什么?3．使用油鏡應特別注意哪些間題？4．當物鏡從低倍鏡轉到高倍鏡和油鏡時，對照明度有何要求?實驗二 放線菌、酵母菌和霉菌的形態(tài)觀察一、實驗目的和內容（一）實驗目的1. 辨認放線菌的營養(yǎng)菌絲、氣生菌絲、孢子絲、孢子的形態(tài)，學習放線菌的觀察方法。 六、實驗報告1. 分別繪出在高倍鏡和油鏡下觀察到的大腸桿菌及金黃色葡萄球菌的形態(tài)，注明物鏡放大倍數和總放大率。 7．使用二甲苯擦鏡頭時，二甲苯不能過多，以防溶解固定透鏡的樹脂。 4．老齡菌因體內核酸減少，會使陽性菌被染成陰性菌，故不能選用。2．在染色過程中，不可使染液干涸。 (三) 結果 革蘭氏陽性菌染成藍紫色, 革蘭氏陰性菌染成淡紅色。 （4）擦凈顯微鏡，將各部分還原；將接物鏡呈“八“字形降下，不可使其正對聚光器，同時降下聚光器，轉動反光鏡使其鏡面垂直于鏡座。 （2）取出裝片。重復觀察時可比第一次少加香柏油。 （4）再次觀察，提起鏡筒，換上另一塊細菌染色裝片，依次用低倍鏡、高倍鏡和油鏡觀察。如因鏡頭下降未到位或鏡頭上升太快未找到物像．必須再從側面觀察，將油鏡降下，重復操作直至物像看清為止。 （2）從側面注視，小心慢慢降下鏡筒，使油鏡浸在油中至油圈不擴大為止，鏡頭幾乎與裝片接觸，但不可壓及裝片，以免壓碎玻片，損壞鏡頭。 4. 油鏡觀察 （1）提起鏡筒約2cm，將油鏡轉至正下方。將最適宜觀察部分移至視野中心，繪圖。再用目鏡觀察，仔細調節(jié)光圈，使光線的明亮度適宜。移動裝片，把