第五章酶動力學(xué)引論-在線瀏覽
2024-12-14 12:16本頁面
【正文】 motrypsin (active) S14R15 T147N148 Trypsin ?Chymotrypsinogen (active) pChymotrypsin I16 L13 A149 Y146 Disulfide bonds 新的 Ile16 N端可 穩(wěn)定 Asp194 Asp 102 His 57 Ser 195 Asp 194 Gly 193 Ile 16 +NH3 Catalytic Triad 酶的最適 pH ? 一般地說 ，一種酶僅在一個狹窄的 pH范圍內(nèi)才具有最高的活力。 ? Km值作為常數(shù)只是對固定的底物、一定的溫度、一定的 pH等條件而言的。第五章 酶動力學(xué)引論 ? 底物濃度 ? 酶濃度 ? pH ? 溫度 ? 激活劑 ? 抑制劑 主要內(nèi)容 —— 研究各因素對酶催化反應(yīng)速度的影響 酶催化應(yīng)速度與底物濃度的關(guān)系 p203 酶催化反應(yīng)進(jìn)程曲線 0510150 50 100 150 200 250 300水解時間(min)DH(%)537酸性蛋白酶，50℃，pH3,E/S=4%（酶與底物的濃度之比）AS1398中性蛋白酶50℃，pH7,E/S=2%胰蛋白酶37℃，pH8,E/S=4%胰酶37℃，pH8,E/S=4%Alcalase60℃,pH8,E/S=12AU(安森單位)/Kg木瓜蛋白酶，60℃,pH5,E/S=10%Protamex50℃,E/S=24AU/Kg一底物或其他底物濃度不變時適用 反應(yīng)出現(xiàn)平衡的原因 05101520250 100 200 300水解時間（ min ）水解度DH%E+S ES E+P1+P2 Note p2 米氏方程 V=Vmax[S]/(Km+[S]) V = Kcat[E]t[S] /(Km + [S]) Kcat: 催化常數(shù)（酶的轉(zhuǎn)化數(shù)） 每秒種每個酶分子轉(zhuǎn)換底物的微摩爾數(shù) Kcat/Km: 專一性常數(shù) Km, Kcat, and kcat /Km 米氏方程的意義 ? 米氏常數(shù)為反應(yīng)速度是最大反應(yīng)速度一半時的底物濃度， Km單位為摩爾濃度（ mol/L） ? Km對于特定的反應(yīng)條件而言是一個特征常數(shù)。它只與酶的性質(zhì)有關(guān)而與酶的濃度無關(guān)，不同的酶，具有不同的 Km值。 ? Km值可以反映酶同底物的親和力。 ? 其他實驗參數(shù)：反應(yīng)的時間、溫度、底物的性質(zhì)及濃度、緩沖液的性質(zhì)及濃度、介質(zhì)的離子強(qiáng)度和酶制劑的純度等。 substrate X 五、抑制劑對反應(yīng)速度的影響 酶的抑制劑（ inhibitor）：凡能使酶的催化活性下降而不引起酶蛋白變性的物質(zhì) 不可逆性抑制：（ irreversible inhibition）抑制劑與酶的必需基團(tuán)以牢固的共價鍵結(jié)合，從而使酶活喪失，不能用透析、超濾等去除抑制劑 。 As CHClClCHCl + ESHSHESSAs CH CHCl +HCl2路易士氣 巰基酶 失活的酶 ESHSH+ + 2+ Hg ESSHg H +2? 重金屬鹽引起的巰基酶中毒可用二巰基丙醇（ BAL）解毒。 ++R OPOO XR39。 X HX有機(jī)磷化合物 羥基酶 失活的酶 R OPOO CHR39。 CH CCl2敵百蟲 敵敵畏 R OPOOXR39。膽堿酯酶為羥基酶，有機(jī)磷殺蟲劑中毒時，此酶活受抑制，結(jié)果造成乙酰膽堿的堆積，造成神經(jīng)過度興奮直至抽搐而死。 NCH 3CHNOH可逆性抑制 競爭性抑制 特點 :抑制劑與底物結(jié)構(gòu)相似 . 抑制劑與底物結(jié)合在酶的同一位點 抑制作用可被高濃度的底物減低以至消除 . Km增大 ,Vmax不變 . [ E I ][ E ] [ I ]=K4K5K i =K5 K4EII+K3K2K1E +S ES E +PV=V m
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