酶促反應(yīng)動(dòng)力學(xué)實(shí)驗(yàn)-在線瀏覽
2025-06-04 12:15本頁面
【正文】 )以對[s]作圖，這時(shí)斜率為，縱截距為。具體原理如下：本實(shí)驗(yàn)以堿性磷酸酶為例，用磷酸苯二鈉為其作用物，堿性磷酸酶能分解磷酸苯二鈉產(chǎn)生酚和磷酸，在適宜條件下（，和60℃），準(zhǔn)確反應(yīng)13分鐘。在一定條件下色澤深淺與光密度成正比。【儀器與試劑】儀器：1. 恒溫水浴2. 721型分光光度計(jì)試劑：1． 酚試劑：稱鎢酸鈉（W2O）25g置1500mL磨口回流裝置內(nèi)，加蒸餾水700mL，85%磷酸50mL和濃硫酸100mL。小火加熱，回流10h（燒瓶內(nèi)加小玻璃珠數(shù)顆，以防溶液溢出），再加入硫酸鋰（LiSO4）150g，蒸餾水50mL及液溴數(shù)滴。冷卻后定容至1000mL，過濾即成，此液應(yīng)為鮮黃色，不帶任何綠色。若此貯存液使用過久，顏色由黃變綠，可加幾滴液溴，煮沸幾分鐘，恢復(fù)原色仍可繼續(xù)使用。2． ：稱取625mg磷酸苯二鈉（C6H5PO4Na2?2H2O），溶于1,000ml容量瓶中，加蒸餾水稀釋至刻度，加數(shù)滴夜溴以防腐，置冰箱內(nèi)可保存一年之久?！緦?shí)驗(yàn)步驟】取6支試管按下表加入試劑：123456（ml）蒸餾水（ml）堿性緩沖液（ml）混勻后，60℃欲溫5分鐘堿性磷酸酶液（ml）混勻后，60℃水浴13分鐘（準(zhǔn)確計(jì)時(shí)）注意：1）加入堿性磷酸酶液要快速、準(zhǔn)確。酚試劑（ml）10%Na2CO3(ml)混勻后，室溫放置15分鐘注意：1）酚試劑為顯色劑，同時(shí)為酶的變性劑，故加入酚試劑后酶促反應(yīng)即停止?！窘Y(jié)果處理】1 將各管光密度和底物濃度記入下表管號1/[S]1/[S]123452以1/，1/[s]為橫坐標(biāo)，按Lineweaver Burk作圖，求出堿性磷酸酶的Km值。【思考題】1） Km 的意義及其影響因子2） 為什么酶促反應(yīng)速度以初速度表示3） 4） 分析自己的實(shí)驗(yàn)數(shù)據(jù)實(shí)驗(yàn)（二）——溫度對酶活性的影響【實(shí)驗(yàn)?zāi)康摹? 了解溫度對酶活性及酶促反應(yīng)速度的影響，加深對酶特性的認(rèn)識。一般而言，若酶處于過高的溫度環(huán)境中，會(huì)使酶活性永久喪失；而若處于極低溫度的環(huán)境中只會(huì)使酶活性受到抑制，一旦溫度適宜，酶又會(huì)全部或部分的恢復(fù)其活性。2．%%氯化鈉溶液：，溶于100ml蒸餾水（需加熱）。%淀粉液；B管使用移液槍加入稀釋100倍的唾液，相對應(yīng)的兩支試管置于設(shè)定的溫度下預(yù)溫5min。注意：轉(zhuǎn)移A管試劑前需將其搖勻。4．中止反應(yīng)準(zhǔn)確反應(yīng)13min，向1號管加入2滴1M HCl溶液，立即混勻，中止反應(yīng)，按上一步的順序和時(shí)間間隔依次對
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