酶促反應(yīng)動力學(xué)(2)-在線瀏覽
2025-07-13 22:00本頁面
【正文】 min1 、 當(dāng) t=3min時(shí)，可以求得 mol/l xS=6 % mol/l ?k? ? ???S? ? ? ? 70 106%6 ????? SP （ 2）當(dāng) [S0]為 1 106mol/l時(shí)，仍可視為一級反應(yīng)， ∴ t=3 min時(shí)，同樣可求得 xS=6 % mol/l mol/l ? ? ???S? ? ? ? 80 106%6 ????? SP3）據(jù) 得 mol/l 值隨測定的底物濃度、反應(yīng)的溫度、 pH及離子強(qiáng)度而改變。如果酶的專一性不高，可催化幾種底物發(fā)生反應(yīng)時(shí)， km值最小的就表示酶與這一底物的親和力最大，反之，則最小。那么只要稍微改變基質(zhì)濃度， 的變化就很 大，即反應(yīng)速率對基質(zhì)濃度改變的敏感性很大，如果 或 時(shí)，基質(zhì)濃度相差 1000倍，但反應(yīng)速率只增加一倍，即在生理上保持 是沒有意義的 。 ⑤ Km值可以幫助推斷某一代謝反應(yīng)的方向和途徑。 Km可以幫助推斷某一反應(yīng)的方向和途徑 乳酸脫氫酶 乳酸 丙酮酸脫氫酶 乙酰 CoA 丙酮酸脫羧酶 乙醛 Km= Km= mol/L Km= 丙酮酸 （ 2） Vmax和 K3(Kcat)的意義 在一定的酶濃度下，酶對特定底物的 Vmax也是一個(gè)常數(shù)。 Vmax與 K3成線性關(guān)系，而直線的斜率為 K3。 四、酶動力學(xué)圖解法 要建立一個(gè)完整的動力學(xué)方程，必須通過動力學(xué)實(shí)驗(yàn)確定其動力學(xué)參數(shù)。但直接應(yīng)用MichaelisMenten方程求取動力學(xué)參數(shù)所遇到的主要困難在于該方程為非線性方程。 1. 雙倒數(shù)圖解法（ Lineweaver Burk圖解） V=V m a x [ S ]K m + [ S ]雙倒數(shù) 1 Km 1 1 ??? = ?? ? ??? + ?? V Vmax [S] Vmax （一）圖解法 4 2 0 2 4 6 8 101/[ S]( 1/m m ol .L1)1/v1/Km 1/Vmax 斜率 =Km/Vmax 雙倒數(shù)法應(yīng)用廣泛，但有兩個(gè)缺點(diǎn)： 選用基質(zhì)濃度不宜等量增加，否則在作圖時(shí)，點(diǎn)都會集中在縱軸附近，難于正確作圖。 反應(yīng)速率測定稍有誤差，其倒數(shù)值誤差必將擴(kuò)大，特別是在低濃度基質(zhì)測定時(shí)，引起的誤差更大，這樣將影響直線斜率，影響 rmax及 Km值 的測定。這時(shí)，就可選用積分方程式來測定酶的 Vmax和 Km。 上式可改寫為 : ? ?? ?? ? ? ?MM KrtSSKSStm a x00 1l o ??????? ????MK1?MKrmax上式也是直線方程式，斜率為 ，直線交點(diǎn)于縱坐標(biāo) ，與橫坐標(biāo) 交于 。 解：從表 S及 V值，計(jì)算得 1/S 及 1/V 值，作圖。 抑制作用分為可逆抑制與不可逆抑制兩大類 。 如果抑制劑與酶的基因成共價(jià)結(jié)合 ， 則此時(shí)不能用物理方法去掉抑制劑 。 例如重金屬離子 Hg2+”、Pb2+”等對木瓜蛋白酶 、 菠蘿蛋白酶的抑制都是不可逆抑制 。 這種抑制稱為競爭性抑制 ， 該物質(zhì)稱為競爭性抑制劑 。 在琥珀酸脫氫酶催化琥珀酸為延胡索酸時(shí) ， 丙二酸是其競爭性抑制劑 。 底物的反應(yīng)速率方程為 : ? ? ? ?? ? ? ?? ? 0211 ???? ??? ESkkSEkdtESd? ? ? ?? ? ? ? 033 ??? ?? EIkIEkdtEId? ? ? ? ? ? ? ?EIESEE ???0又： 經(jīng)整理后可得 ? ?? ? ? ?? ?? ?SkSrSKIKSrrmImImSI ???????????????1m a xKI— 抑制劑的解離常數(shù) （ mol/l） KmI— 有競爭性抑制時(shí)的米氏常數(shù)（ mol/l） 可以看出，
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