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生物制品的制備ppt課件-展示頁

2025-05-21 12:35本頁面
  

【正文】 rinciple of preparing AC media ?9)親和層析的基本操作方法: ? ① 平衡( Equilibration) 用平衡 Buffer沖洗柱體,至基線平穩(wěn) . ② 樣品上柱和沖洗 ( Sample application and wash) 樣品中的目的物與層析介質(zhì)選擇性的吸附,雜質(zhì)不被吸附。 ?,因?yàn)樵诮怆x配 基復(fù)合物時(shí)所 需的條件就要強(qiáng)烈,這樣可能使生物分子變性。 ?在溫和的條件下 能與配基共價(jià)偶聯(lián)。 ?顆粒均勻,具有良好的流速。 ?糖蛋白與植物凝集素。 ?激素與其受體。 ?DNA與互補(bǔ) DNA或 RNA( cDNA、mRNA)。(見 Fig Fig2) 。 ?② 當(dāng)含有混合組份的樣品(流動(dòng)相)通過此固定相時(shí),只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì),才能被固定相吸附結(jié)合,其它沒有親和力的無關(guān)組份就隨流動(dòng)相流出。 ?因此應(yīng)用范圍受到一定的限制。 ?基質(zhì)( matrix): 亦稱為載體( vector),是構(gòu)成固定相的骨架 。 親和色譜( affinity chromatography) ? 1)基本概念( basic concept) ?親和層析 是利用待分離物質(zhì)與其特異性配基之間 特異性的親和力 進(jìn)行分離的一類特殊的層析技術(shù)。 ( 4)親和層析法( affinity chromatography) ?大部分生物活性物質(zhì)都有其作用的靶物質(zhì),如酶與底物(或抑制劑)、抗原與抗體、激素與受體等,它們之間有特異的親合作用,利用該性質(zhì)設(shè)計(jì)的特異層析分離技術(shù)稱為親和層析。 由于具有該性質(zhì) , 利用帶電性質(zhì)進(jìn)行分離是極其有效的方法 。 它們具有 等電點(diǎn) , 在離開等電點(diǎn)的 pH時(shí)便會(huì)帶正或負(fù)電荷 。這種現(xiàn)象稱為分子篩效應(yīng)。 凝膠層析又稱分子篩層析,主要根據(jù)混合物中分子的大小和形狀不同 ,在通過凝膠時(shí),分子的擴(kuò)散速率各異而達(dá)到分離的目的。 (2) 按分子大小分離的方法 : 有 超濾法 (ultrafiltration)和 透折法 ( dialysis)(即膜分離方法) 、凝膠層析法 ( gel chromatography)、 超速離心法 ( ultra centrifugation轉(zhuǎn)速大于 20 000r/min) 等。常用的有鹽析法( salting out)、有機(jī)溶劑沉淀法( anic solvent precipitation)、等電點(diǎn)沉淀法( isoelectric precipitation)、與靶物質(zhì)結(jié)合沉淀法(如抗體 — 抗原)( target banding precipitation)等。分離純化方法有: (1)沉淀法 ( precipitation): 蛋白質(zhì)、酶的初步純化往往用沉淀法。 ③ 注意提取的 溫度 、 pH、 變性劑 等因素 。 提取試劑主要有:水 、 緩沖溶液 、 鹽溶液 、 乙醇 、 其他有機(jī)溶劑 ( 如氯仿 、 丙酮等 ) 。 ( 2) 提取 ( extraction) 生物組織與細(xì)胞破碎后要立即進(jìn)行提取 。 ④ 超聲波振蕩破碎法 , 該方法破碎效果較好 , 但由于局部發(fā)熱 , 對(duì)活性有損失 。常用的破碎方法: ① 磨切法 , 該法屬于機(jī)械破碎方法 , 設(shè)備有組織搗碎機(jī) 、 膠體磨 、 勻漿器 、 勻質(zhì)機(jī) 、 球磨機(jī) 、 乳缽等 。 該法適用于液體原料 , 如發(fā)酵液 、 提取液等 。 ③ 防腐劑保鮮 。 常用的有機(jī)溶劑是丙酮 。 常用 40℃ 速 凍 。 原料的保存方法主要有 : ① 冷凍法 。 ( 2)原料的預(yù)處理與保存: ① 動(dòng)物原料 : 采集后要立即處理,去除結(jié)締組織、脂肪組織等,并迅速冷凍貯存 。 第二章 生物制品的制備 ( Preparation) 第一節(jié) 一般生物制品的制備方法 (Preparation of general biopreparate ) 一、生物制品原料的選擇、預(yù)處理與保存方法 ( Selection、 pretreatment and preservation of raw material of biopreparate) ( 1)原料選擇 原料的選擇原則 : ①有效成分含量高,新鮮; ②原料來源豐富,產(chǎn)地較近; ③原料中雜質(zhì)含量少; ④原料成本低等。 原料的選擇注意事項(xiàng): ① 植物原料生長(zhǎng)的季節(jié)性; ② 微生物原料的對(duì)數(shù)期; ③ 動(dòng)物原料的年齡與性別 。 ② 植物原料 : 要擇時(shí)采集并就地去除不用的部分 , 保鮮處理; ③ 微生物原料 : 要及時(shí)將菌細(xì)胞與培養(yǎng)液分開 , 進(jìn)行保鮮處理 。 該方法適用于所有生物原料 。 ② 有機(jī)溶劑脫水法 。該法適用于原料少而價(jià)值高 、 有機(jī)溶劑對(duì)活性物質(zhì)沒有破壞作用的原料 , 如腦垂體等 。 常用乙醇 、 苯酚等 。 二、生物制品的提?。?extraction) (1)生物組織與細(xì)胞的破碎 ( obtrude of tissue and cell):生物制品大部分存在于生物組織或細(xì)胞中,要提高提取率,破碎過程是非常重要的。 ② 壓力法 , 有加壓 、 減壓 、 滲透壓三種 ③ 反復(fù)凍融法 , 設(shè)備簡(jiǎn)便 , 活性保持好 , 但用時(shí)較長(zhǎng) 。 ⑤ 自溶法或酶解法 , 用得較少 。 提取時(shí) , 首先要
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