生物制品的制備ppt課件(存儲版)
【正文】 血是一種紅色混濁的、具有一定腥味與粘滯性的液體。 血（無抗凝劑） → 自然凝固 → 分離出血清（無纖維蛋白酶原、凝血因子等） 血 +混合抗凝劑 草酸銨 草酸鉀 離 心 上清血漿 總蛋白： % 白蛋白： % 水： 9092% （現(xiàn)常用肝素、檸檬酸鈉） （ 2）工藝路線 利凡諾 ,NaHCO3 ,離心分離 絡(luò)合物 蒸餾水， NaCl， HCl 弱酸性， 40℃ ，離心 離心液 濃 縮 超 濾 濃縮液 滅活病毒 65℃ ， 1h； 60℃ ， 10h 熱處理液 除菌 除菌過濾 白蛋白液 干燥 冷凍干燥 白蛋白 去雜蛋白 人血漿（ %） 男性尿 沉淀 10℃ 下， 上清尿液 酸 化 酸化尿 吸 附 硅藻土， 5℃ 硅藻土吸附物 洗滌 5℃ ，水 硅藻土柱 洗脫 %氨水， 洗脫液 去熱源、色素 DEAESephadexA50柱， , （二乙氨乙基葡聚糖） 流出液 （活性部分 ） 濃 縮 羧甲基纖維素（ CMC柱， ) CMC柱 洗脫（ HACNaAC) NH3+NaCl, 洗脫液 透 析 H2O,4℃ 透析液 凍 干 成品 二、尿激酶（ urokinase）的制備 一噸可制成 90克粗品，治療各種新血栓形成或血栓梗塞疾病。 ?SOD存在于動物、植物、微生物中，有 CuZnSOD、 MnSOD、 FeSOD等。獲取的基因是染色體 DNA。 凝膠電泳及酶切圖譜測定 核酸雜交 DNA序列測定 （ 3）目的基因的鑒定 常用的載體有： 細(xì)菌質(zhì)粒 質(zhì)粒是一些細(xì)菌的亞細(xì)胞結(jié)構(gòu)，是存在于多種細(xì)菌染色體外的遺傳單位。 目的基因與載體的重組 原核表達(dá)系統(tǒng)： 大腸桿菌 、 枯草芽孢桿菌、鏈霉菌 。 同時取樣作各類檢定工作，并用于建立主代 種子批 。 。其中的分離純化技術(shù)是極其重要的一環(huán)，有時又將生物制品的這一環(huán)節(jié)稱為后處理，它包括破菌、固液分離、濃縮、純化直至得到純品。 pBR322 Apr PstⅠ BamHⅠ SalⅠ 用限制性內(nèi)切酶和連接酶將所需目的基因插入選定的載體中。世界上第一個人工化學(xué)合成并表達(dá)的基因是生長素釋放抑制素基因。 上游技術(shù)：工程菌的構(gòu)建 下游技術(shù)：目的基因產(chǎn)物的分離純化 一、上游技術(shù)：工程菌的構(gòu)建 目的基因的分離制備與鑒定 重組載體的選擇與制備 目的基因與載體的重組 構(gòu)建的重組載體轉(zhuǎn)染適當(dāng)?shù)氖荏w細(xì)胞（表達(dá)載體） 篩選含有重組子的細(xì)胞進(jìn)行擴(kuò)增 目的基因的分離制備與鑒定 （ 1）目的基因所處染色體的確定 （ 2）目的基因的獲取 目的基因可以是染色體 DNA、 cDNA或人工合成的 DNA，目的基因不同，獲取方法也不同。 第三節(jié) 動物來源生物制品的制備 （ 2）工藝路線 豬胰臟 提取 乙醇，草酸， 1015℃ 提取液 堿化 氨水， 堿化液 酸化 硫酸， ,5 ℃ 酸化液 濃縮 30 ℃ 以下，減壓 濃縮液 去脂 速熱速冷 去脂溶液 鹽析 NaCl, 鹽析物 水、丙酮、氨水（ ~） 除酸性蛋白 濾液 鋅沉淀 氨水， Zn（ Ac） 2， 沉淀 除堿性蛋白，結(jié)晶 Zn（ Ac） 2，丙酮、氨水， ，5℃ 以下，檸檬酸調(diào) 結(jié)晶 洗滌，干燥 水、丙酮、乙醚 胰島素精品 超氧化物歧化酶（ SOD）的制備 ?超氧化物歧化酶（ superoxide dismutase, SOD）與機(jī)體抗衰老、腫瘤發(fā)生、自身免疫疾病和輻射防護(hù)等有關(guān)。對酸較穩(wěn)定，受熱變性。 ? 離子交換法 （ ionexchange )：氨基酸是兩性電解質(zhì) ， 在一定 pH條件下 ， 不同氨基酸帶電性質(zhì)及解離狀態(tài)是不相同的 ， 因此在離子交換劑上被吸附的強(qiáng)度不同 。 ③ 酶水解法 水解不夠完全。它是通過極性和離子力等把各種化合物結(jié)合到固體吸附劑上。 ? 離子交換層析法 （ ion exchange chromatagraphy)：粘多糖的聚陰離子能夠很好地被陰離子交換劑吸附和分離，如Dowex IX2（商品名）離子交換樹脂、DEAE離子交換纖維素（二乙胺乙基）等。 降解法 （ degradation） 適用于從組織中提取結(jié)合比較牢固的粘多糖 （ mucoitin） 。形成雜質(zhì)峰（見下圖）。 ?顆粒均勻，具有良好的流速。（見 Fig Fig2） 。 親和色譜（ affinity chromatography） ? 1）基本概念（ basic concept） ?親和層析 是利用待分離物質(zhì)與其特異性配基之間 特異性的親和力 進(jìn)行分離的一類特殊的層析技術(shù)。這種現(xiàn)象稱為分子篩效應(yīng)。分離純化方法有： (1)沉淀法 （ precipitation）： 蛋白質(zhì)、酶的初步純化往往用沉淀法。 ④ 超聲波振蕩破碎法 ， 該方法破碎效果較好 ， 但由于局部發(fā)熱 ， 對活性有損失 。 常用的有機(jī)溶劑是丙酮 。 第二章 生物制品的制備 （ Preparation） 第一節(jié) 一般生物制品的制備方法 (Preparation of general biopreparate ) 一、生物制品原料的選擇、預(yù)
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