《生物制品的制備》ppt課件-文庫吧
2025-04-27 12:35 本頁面
【正文】 酶與底物（或抑制劑）、抗原與抗體、激素與受體等，它們之間有特異的親合作用，利用該性質(zhì)設(shè)計的特異層析分離技術(shù)稱為親和層析。 ?親和層析 分離專一性強，操作簡便，是當(dāng)前應(yīng)用很廣泛的分離方法之一。 親和色譜（ affinity chromatography） ? 1）基本概念（ basic concept） ?親和層析 是利用待分離物質(zhì)與其特異性配基之間 特異性的親和力 進行分離的一類特殊的層析技術(shù)。 ?配基（ ligand） ： 被固定在基質(zhì)上的分子稱為配基，配基和基質(zhì)是以共價鍵結(jié)合的。 ?基質(zhì)（ matrix）： 亦稱為載體（ vector），是構(gòu)成固定相的骨架 。 ?2）親和層析有如下特點（ Characteristics of Affinity Chromatography） ? 純化 過程簡單 、迅速； ? 分離 效率 高； ? 產(chǎn)物 純度 高； ? 必須針對某一分離對象制備專一的配基及尋求穩(wěn)定的層析條件。 ?因此應(yīng)用范圍受到一定的限制。 ?3）親和層析的基本原理 （ Mechanism of Affinity Chromatography） ?① 親和的一對分子中的一方以共價鍵形式與不溶性載體相連作為 固定相吸附劑 。 ?② 當(dāng)含有混合組份的樣品（流動相）通過此固定相時，只有和固定相分子有特異親和力的物質(zhì)，才能被固定相吸附結(jié)合，其它沒有親和力的無關(guān)組份就隨流動相流出。 ?③ 然后改變流動相成份，將結(jié)合的親和物洗脫下來。（見 Fig Fig2） 。 （ Fig1. Mechanism of AC） （ Fig2. Mechanism of AC） 抗原 專一抗體 基質(zhì) 具有特異性親和作用的生物分子 ?4）配基的種類 (sorts of ligand) ?抗原與抗體。 ?DNA與互補 DNA或 RNA（ cDNA、mRNA)。 ?酶與其底物。 ?激素與其受體。 ?維生素與結(jié)合蛋白。 ?糖蛋白與植物凝集素。 ?5）親和層析載體的性質(zhì)與選擇 ?親和層析載體的選擇 （ selection of vectors） ?多孔的立體網(wǎng)狀結(jié)構(gòu)，能使被親和吸附的大分子自由通過。 ?顆粒均勻，具有良好的流速。 ?具有惰性，盡量減少非專一性吸附。 ?在溫和的條件下 能與配基共價偶聯(lián)。 ?6）常用的親和層析載體 （ Vectors of Affinity Chromatography） ?纖維素（ cellulose） ?葡聚糖凝膠（ Sephadex） ?瓊脂糖凝膠（ Sepharose） ?聚丙烯酰胺凝膠（ Biogel） ?多孔玻璃珠（ BioGlass） ?其它新型載體（ Other gels） ?7） 親和層析配基的選擇 （ Selection of ligand） ?。 ?，因為在解離配 基復(fù)合物時所 需的條件就要強烈，這樣可能使生物分子變性。 ?，可用于和 載體相連，同時又不影響配基與生物分子之間的親和力。 8）載體、配基、目的物的連接 （ Conjunction of vector、 ligand and target material） ? 載體（ Vectors or Matrix） + ? 配基（ Ligand） + ? 目的物（ target material） Fig AC relies upon a reversible highly specific binding reaction. Fig Spacer arm principle A spacer is sometimes used to ensure full accessibility of the affinity ligand. Fig Principle of preparing AC media ?9）親和層析的基本操作方法： ? ① 平衡（ Equilibration） 用平衡 Buffer沖洗柱體，至基線平穩(wěn) . ② 樣品上柱和沖洗 （ Sample application and wash） 樣品中的目的物與層析介質(zhì)選擇性的吸附，雜質(zhì)不被吸附。用上樣Buffer沖洗柱體，雜質(zhì)被沖洗下來。形成雜質(zhì)峰（見下圖）。 ③ 洗脫（ Elution） 選擇適當(dāng)?shù)臈l件，將吸附在親和介質(zhì)上的目的物解吸下來（見下圖）。 四、核酸類制品的分離純化方法 （ Isolation and depuration of nucleic acid ） ?核酸類藥物生產(chǎn)方法主要有 提取法和發(fā)酵法。 提取法 生產(chǎn) DNA和 RNA，先提取核酸和蛋白質(zhì)復(fù)合物，再解離核酸與蛋白質(zhì)，然后分離 RNA與 DNA。 發(fā)酵法 主要用于生產(chǎn)單核苷酸 。 高 RNA含量酵母 搖瓶發(fā)酵 種子培養(yǎng)物 連續(xù)發(fā)酵 發(fā)酵液 過濾 酵母菌體 NaOH 20℃攪拌 破壁 氨水處理 離心 上清液 沉淀蛋白 三氯乙酸 酸調(diào)pH 核酸粗品 乙醇洗滌 干燥 RNA干品 五 、 糖類制品的分離純化方法 （ Isolation and depuration of sugar ） 由于各種糖類制品的性質(zhì)和原料來源不同 ， 沒有統(tǒng)一規(guī)范的提取和純化工藝 。 這里只介紹 多糖和粘多糖 的一般分離純化方法 。 （
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